《CVB3類病毒顆粒的分子裝配機制研究》是依託蘇州大學，由董春升擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：CVB3類病毒顆粒的分子裝配機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：董春升
- 依託單位：蘇州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
類病毒顆粒（virus-like particle，VLP）是由一種或幾種病毒結構蛋白形成的空心顆粒，由於其表面能夠高度重複展示病毒抗原， VLP顆粒具有誘導機體免疫的強大作用。我們以柯薩奇病毒B3(CVB3)VLP為研究對象，利用桿狀病毒表達系統，在昆蟲細胞表達生產CVB3類病毒顆粒VLP,研究病毒結構蛋白VLP的分子裝配機制；通過在樹突狀細胞研究VLP顆粒的轉運和加工途徑，進一步認識VLP和樹突狀細胞的相互作用；最後利用病毒感染小鼠模型，評估VLP對CVB3心肌炎小鼠的保護效果，比較和明確VLP疫苗和DNA疫苗，蛋白亞單位疫苗的免疫保護作用，探討VLP疫苗的免疫保護作用機制。通過研究，我們期望能夠建立表達三外源基因的桿狀病毒VLP包裝系統，對於VLP顆粒的裝配在分子水平上有進一步的認識，同時能更深刻的了解VLP做為疫苗的免疫學作用機制，為VLP疫苗的設計發展提供潛在的理論指導。
結題摘要
VLP（virus-like particle, VLP）是由病毒一種或者幾種結構蛋白所形成的空心顆粒， 因為不含有病毒核酸，所以VLP不能自主複製，不具有感染性，而且VLP表面能夠重複高密度的抗原表位，從而能夠誘導強有力的免疫應答，因此它對多種疾病來說都是一種理想的疫苗形式。VLP及相關的免疫原性研究是VLP疫苗研究的一個方向之一。我們計畫在桿狀病毒表達系統中研究CVB3 VLP顆粒的分子裝配及其免疫學特性及如何被樹突狀細胞攝取，又如何在樹突狀細胞內運輸加工，我們在國家自然基金委的支持下開展了此課題的研究。 本研究的主要目的就是以CVB3 VLP模型, 研究VLP的分子裝配。（1）我們首先建立了CVB3誘導的小鼠病毒性心肌炎模型。（2）在此基礎上，我們利用水泡性口炎病毒VSV反向遺傳學系統，在水泡性口炎病毒中插入了CVB3主要結構抗原VP1，製備了含有CVB3 VP1的VSV假病毒顆粒。利用此疫苗滴鼻免疫小鼠，誘導了很好的體液免疫和黏膜免疫，保護小鼠免於致死劑量病毒的攻擊。（3）我們改造了桿狀病毒表達系統，在桿狀病毒表面同時插入了水泡性口炎病毒囊膜蛋白VSV-G，提高其在哺乳動物細胞的轉導效率，並製備了表達了VP1的重組桿狀病毒VLP顆粒。（4）引入產氣肉毒梭菌腸毒素（Clostridium perfringens enterotoxin, CPE）C端30個胺基酸CPE30，設計了新型的靶向M細胞的chi-CPE30-pVP1黏膜疫苗，建立一高效的新型黏膜疫苗的分子遞送系統。我們成功製備了chi-CPE30-DNA複合物顆粒，粒徑分析證實chi-CPE30-pVP1為直徑約200-400nm，呈球形的顆粒複合物。DNA保護試驗證實chi-CPE30可有效保護包裹於其中的DNA，使不被DNase I降解，而在chi-CPE30被降解後DNA又可完整釋放，在細胞和小鼠體內能特異性靶向M細胞。（5）利用VSV-VP1的類病毒顆粒免疫小鼠，能夠檢測到小鼠腸系膜淋巴結樹突狀細胞的成熟。 通過以上CVB3結構蛋白VLP的裝配機制研究, 以及在病毒性心肌炎小鼠模型中VLP的免疫學特性探究， 將有助於我們認識VLP顆粒的分子裝配機制, 以及在免疫系統中的加工處理過程, 而且本研究可能拓寬我們對VLP顆粒在免疫應答中的作用機制的認識，為抗病毒感染的疫苗設計提供潛在的理論指導。
