《CEA聯合4-1BBL基因疫苗抗大腸癌的實驗研究》是依託蘇州大學，由葉建新擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：CEA聯合4-1BBL基因疫苗抗大腸癌的實驗研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：葉建新
- 依託單位：蘇州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
CEA為靶抗原的腫瘤疫苗研究近幾年有了較大發展，多種疫苗形式可不同程度地激發特異性的CTL應答，但臨床療效仍較差，目前認為難以引起高強度的免疫應答反應是疫苗失敗的重要原因。課題組先前構建了含大鼠4-1BBL重組減毒沙門氏菌（SL3261），該疫苗菌灌服荷瘤大鼠具有增強細胞免疫功能，同時對大腸癌生長有一定的抑制作用。本研究旨在4-1BBL基礎上聯合CEA，構建含既能誘導特異性抗腫瘤免疫反應（CEA基因），又可增強該反應強度（4-1BBL基因）的pIRES-CEA-4-1BBL重組質粒並轉化SL3261，將該疫苗菌灌服大鼠，通過ELISA、FCM、定量RT-PCR和免疫螢光方法對細胞因子、細胞表型和目標蛋白表達等的檢測，評估疫苗對免疫功能的影響，利用1，2二甲肼建立大腸癌模型，將疫苗菌灌服荷瘤大鼠，檢測疫苗對荷瘤大鼠免疫功能的影響，常規病理方法觀察對腫瘤的抑制作用，為大腸癌疫苗研究提供新思路。
結題摘要
4-1BB/4-1BBL是機體中一對重要的共刺激分子，在抗原提呈細胞(APCs)向T細胞提呈抗原時作為第二信號參與免疫反應， 4-1BBL的逆向信號對APCs具有活化的作用，4-1BBL同T細胞表面的4-1BB結合後提供共刺激信號，因此4-1BB/ 4-1BBL這對共刺激分子可以起到增強免疫的功能。4-1BBL除了作為第二信號參與機體免疫反應外，還直接與表達於樹突狀細胞、T細胞和NK細胞的4-1BB結合，具有抗凋亡和增強細胞活性的作用。CEA為靶抗原的腫瘤疫苗研究近幾年有了較大發展，多種疫苗形式可不同程度地激發特異性的CTL應答，但臨床療效仍較差，目前認為難以引起高強度的免疫應答反應是疫苗失敗的重要原因。 本研究利用分子生物學技術構建重組質粒：pIRES-CEACAM6、pIRES -4-1BBL、pIRES-CEACAM6 -4-1BBL，並通過脂質體轉染COS7細胞，證明重組質粒能在哺乳動物細胞內成功轉錄表達目前基因。將質粒轉入鼠沙門氏菌（LB5000）進行甲基化，利用修飾後質粒轉化終宿主菌SL3261，獲得穩定細菌pIRES/SL3261和疫苗菌pIRES-CEACAM6/SL3261、pIRES-4-1BBL/SL3261、pIRES-CEACAM6-4-1BBL/SL3261。利用1,2-二甲肼連續18周皮下注射建立大鼠大腸癌模型，第8周后間隔2周根據分組連續灌服4次含質粒減毒沙門氏菌，18周處死全部大鼠，結果表明含基因的實驗組較對照組成瘤數量明顯減少、以含雙基因組更為明顯，轉移和Dukes分期也有類似結果。流式細胞儀檢測外周血和和脾臟中細胞表型並利用PHA刺激脾細胞分泌IFN-γ水平，免疫組織化學法檢測大腸、脾臟和肝臟等組織中淋巴細胞表型外周血和脾臟細胞表型檢測顯示活化T細胞較其它荷瘤組明顯增高，脾細胞PHA刺激試驗後分泌IFN-γ的能力也明顯增強。 含有CEACAM6和4-1BBL雙基因的重組減毒沙門氏菌可能通過提高CD3+CD8+ T細胞和NK細胞的浸潤,減少Foxp3細胞表達，促進Th1極化，抑制Th2及Th17極化，誘導特異與非特異性免疫，並打破免疫抑制微環境的機制來抑制腸道腫瘤。通過研究雙基因疫苗的全身免疫反應，含有CEACAM6和4-1BBL雙基因的重組減毒沙門氏菌可以刺激機體產生特異與非特異性的抗腫瘤免疫。
