《AchR-Fc融合蛋白靶向BCR治療重症肌無力的基礎研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由李柱一擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：AchR-Fc融合蛋白靶向BCR治療重症肌無力的基礎研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：李柱一
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
重症肌無力(MG)是典型的自身免疫性疾病，乙醯膽鹼受體抗體(AchRab)是其特異性致病因子，如能將分泌AchRab的B細胞清除將會有效治療MG。然而，目前尚無特異性清除AchR反應性B細胞的手段。前期我們在國家自然科學基金資助下克隆了人AchR α亞單位胞外段基因全長Hα1-210、主要免疫源性區Hα1-121和配體結合區Hα122-210。本研究擬構建AchR-Fc融合蛋白，其AchR特異性結合AchR反應性B細胞，而Fc結合該B細胞表面抑制性受體FcγRⅡB或效應細胞表面FcγR，選擇性誘導致病性B細胞凋亡或介導其被清除；另外用AchR免疫小鼠製備MG模型，在體觀察AchR-Fc融合蛋白對AchR反應性B細胞的作用及對MG病情的影響。本研究首次提出靶向清除MG自身反應性B細胞的新策略，有望獲得對MG具有良好治療效果的新分子，為MG的治療提供新策略，具有重要意義。
結題摘要
本研究以AChRα亞單位基因片段為模板，通過PCR的方法擴增AChRα亞單位胞外段全長基因片段（Hα1-210），將其插入含有CMV啟動子、小鼠Kappa鏈先導序列以及人IgG1從鉸鏈區到CH3基因片段的真核表達載體pAN1782中，構建重組表達載體pAN-Hα1-210；瞬時轉染CHO-K1細胞後取上清，ELISA和Western blot鑑定AChR-Fc融合蛋白的表達；G418篩選轉染後細胞，建立穩定表達細胞系；Protein A親和層析柱純化表達的融合蛋白，SDS-PAGE進一步分析AChR-Fc融合蛋白的表達和純度。利用FCM檢測抗AchRAb雜交瘤細胞TIB175表面BCR和FcγRⅡB表達，並鑑定AchR-Fc融合蛋白對雜交瘤細胞的親和力；體外細胞系實驗證實AchR-Fc融合蛋白可抑制雜交瘤細胞增殖，促進其凋亡，還可通過其Fc段介導效應細胞和補體特異性誘導雜交瘤細胞的凋亡。構建EAMG大鼠模型，無菌分離大鼠脾細胞，初步分析了AchR-Fc融合蛋白在活體外對EAMG大鼠脾AchR反應性B細胞的作用；通過尾靜脈給藥的方式，將AchR-Fc融合蛋白作用於EAMG大鼠，在體實驗發現融合蛋白治療組血清中抗體滴度明顯下降，進一步用ELISPOT分析發現融合蛋白治療組脾臟中AChR反應性B細胞數清除率明顯增高。本研究首次提出靶向清除自身反應性B細胞的新策略，有望建立特異性治療自身免疫病的新平台。
