《2D-LC/MS技術在中藥藥效成分發現中的套用研究》是依託北京大學，由葉敏擔任負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：2D-LC/MS技術在中藥藥效成分發現中的套用研究
- 項目負責人：葉敏
- 依託單位：北京大學
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
近年來，中藥（包括常用中藥）不斷發現結構新穎的藥效成分，對於全面闡明中藥藥效物質具有重要意義，也為新藥研究提供了先導分子。然而，這些新穎成分的發現過程耗時費力，目標性不強。為了提高從複雜的中藥提取物發現新穎藥效成分的效率，本項目將探索建立基於二維液相色譜-質譜聯用技術的研究方法體系，並套用於薑黃、葛根、蟾酥、骨碎補、黃連、三七花等具有不同結構類型的代表性中藥。 首先，構建適合中藥特點的2D-LC/MS分析系統，採用全二維或中心切割模式，最佳化正交條件，建立高峰容量的二維液相色譜分析方法，尤其是凸顯常規方法忽略的微量成分，獲得中藥的整體化學輪廓；再利用各種質譜信息推測結構，快速精準地發現新穎成分（新骨架、新取代方式）。其次，針對性地製備純化目標新穎成分，開展與中藥臨床功效相關聯的生物活性研究，從而進一步發現中藥的新穎藥效成分。本項目將為中藥藥效物質基礎研究提供新穎可靠的方法學。
結題摘要
發現新穎活性成分對於全面闡明中藥藥效物質具有重要意義。為了提高從複雜體系發現新穎成分的效率，本項目將2DLC/MS技術引入中藥分析，建立了適合中藥複雜體系的快速分離和檢測方法，凸顯微量成分，發現並定向分離得到新穎活性成分。在此基礎上，建立靶向代謝組學方法，提升中藥整體質量控制水平。 首先，基於商品化儀器，建立了成熟的2DLC/MS分析策略。通過閥切換、固定相、流動相、洗脫程式的開發，最佳化了適合黃酮、生物鹼、皂苷、酚酸等類型中藥化學成分的2DLC分離方法。例如，中心切割-全二維液相色譜（HC-2DLC）解決了大量微量成分共存的問題；基於流動相的全二維液相色譜（MPD-2DLC）解決了多類型成分共存的問題；多中心切割-全二維液相色譜（MHC-2DLC）解決了複方成分過於複雜的問題。對甘草、葛根、豬牙皂、葛根芩連湯等中藥和複方開展研究，在40分鐘內實現數百個成分的分離，明顯提高了中藥新穎成分的發現效率。 其次，為了高效發現新結構，建立了中性丟失（NL）、母離子掃描（Prec）、關鍵離子過濾（KIF）等高選擇性質譜檢測方法，識別新穎結構，並開展導向製備。例如，建立MNPSS方法，從薑黃發現了846個萜取代薑黃素類新成分，採用統計分析識別新結構碎片，定向分離得到2個新骨架化合物terpecurcumins X/Y。從黃連分離得到14個新穎的生物鹼-奎寧酸雜合物；從黃芩分離得到4個新成分；利用生物催化獲得源於蟾酥的17個蟾蜍甾烯衍生物。這些成分具有抗腫瘤、抗氧化、抗乙醯膽鹼酯酶等活性，為詮釋相應中藥的藥效成分奠定了重要基礎。 最後，基於化學成分系統分析，建立了LC/MS/MS靶向代謝組學方法，用於中藥材及中成藥的質量評價。例如，對95批甘草中151個化學成分進行定量分析，發現27個品種特異性的化學標誌物，可用於區分三種藥用甘草，解決了藥材性狀難以區分的問題。這是迄今最大規模的藥用植物化學成分定量分析研究，提高了中藥的整體質量控制水平。 研究結果在AC、JCA、ASC等知名雜誌發表SCI論文13篇，培養研究生10名。
