《20(S)-原人參二醇靶向抑制PI3K/Akt信號途徑的研究》是依託吉林大學，由睢大篔擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：20(S)-原人參二醇靶向抑制PI3K/Akt信號途徑的研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：睢大篔
- 依託單位：吉林大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
許多腫瘤的發生與PI3K/Akt途徑異常激活密切相關，靶向該途徑是很好的治療腫瘤策略。20(S)-原人參二醇（PPD）是從西洋參莖葉總皂苷分離轉化的人參皂苷元，以其為原料開發了抗癌輔助中藥一類新藥。前期研究發現PPD可誘導A549細胞凋亡並抑制PI3K/Akt信號途徑，對PI3K/Akt異常激活的細胞株有明顯抑制作用。本課題擬觀察PPD誘導A549、MCF-7、MGC803及Hep3B等多種Akt磷酸化程度高的人源性腫瘤細胞株凋亡，及其對凋亡、增殖相關基因和蛋白表達的影響；分析其在體外對腫瘤細胞PI3K/Akt下游途徑的抑制作用；探討激活型Akt基因轉染對PPD誘導凋亡的影響；siRNA干擾Akt驗證PPD的作用靶點；構建Akt過表達轉基因小鼠和野生小鼠，闡明PPD體內抗腫瘤作用靶點與抑制PI3K/Akt途徑相關，為將其開發針對PI3K/Akt途徑異常激活腫瘤的新型靶向治療藥物提供依據。
結題摘要
許多腫瘤的發生與PI3K/Akt途徑異常激活密切相關，靶向該途徑是很好的治療腫瘤策略。20(S)-原人參二醇（PPD）是從西洋參莖葉總皂苷分離轉化的人參皂苷元，以其為原料開發了抗癌輔助中藥一類新藥。結果表明，PPD可明顯抑制A549、MCF-7細胞增殖；PPD可誘導A549、MCF-7細胞凋亡，提示PPD抑制A549、MCF-7細胞增殖可能是通過誘導細胞凋亡實現的；PPD從蛋白和基因水平下調Bcl-2的表達，上調Bax的表達，通過上調Bax/Bcl-2的比率使A549、MCF-7細胞的線粒體膜電位下降，激活Caspase蛋白家族，促使PARP剪下，通過線粒體途徑誘導A549、MCF-7細胞凋亡；PPD通過上調p53的表達和下調p27kip1、C-myc、Cyclin D1和CDK 4的表達誘導A549、MCF-7細胞G0/G1期阻滯。 PPD對A549、MCF-7細胞PI3K/Akt/mTOR信號途徑及其下游靶蛋白磷酸化具有抑制作用；Akt或mTOR過表達能抑制PPD誘導的A549、MCF-7細胞凋亡，轉染空白質粒的細胞凋亡率為3.60±0.36%，轉染mTOR過表達質粒的細胞凋亡率為1.30±0.26%，PPD細胞凋亡率為37.30±3.76%，而PPD與轉染mTOR過表達質粒細胞聯合作用凋亡率為19.73±2.99%，聯合作用與PPD比較有顯著差異，說明體外瞬時轉染mTOR過表達質粒對PPD誘導MCF-7細胞凋亡具有抑制作用；此外，PPD與轉染mTOR過表達質粒共同作用後mTOR磷酸化水平。體外瞬時轉染Akt siRNA或mTOR siRNA可增強PPD誘導的A549、MCF-7細胞凋亡，轉染空白質粒的細胞凋亡率為4.10±1.21%，轉染mTOR siRNA的細胞凋亡率為39.30±2.25%，PPD的細胞凋亡率為27.20±1.90%，而PPD與轉染mTOR siRNA共同作用細胞凋亡率為43.07±3.15%，與PPD比較有顯著差異，PPD與轉染mTOR siRNA共同作用後mTOR磷酸化水平。PPD對裸鼠體內MCF-7細胞移植瘤具有抑制作用並可誘導腫瘤細胞凋亡；免疫組化結果顯示PPD可使P-Akt、P-mTOR、Bcl-2表達降低，Bax表達升高。 提示20(S)-原人參二醇有可能抑制PI3K/Akt通路誘導腫瘤細胞凋亡，可能開發成為腫瘤的治療藥。
