黃蜀葵花總黃酮提取物及其製備方法

《黃蜀葵花總黃酮提取物及其製備方法》是江蘇蘇中藥業集團股份有限公司於2012年3月21日申請的專利，該專利申請號為2012100825537，公布號為CN102600219A，公布日為2012年7月25日，發明人是唐仁茂、徐柏頤、唐海濤、歐陽強、閔文林、周九蘭。

《黃蜀葵花總黃酮提取物及其製備方法》公開了黃蜀葵花總黃酮提取物中棉皮素-3′-葡萄糖苷、槲皮素-3′-葡萄糖苷和異槲皮苷的重量比例，該發明的黃蜀葵花總黃酮提取物有效成分明確、質量更加穩定，有效成分更完全，療效更好更穩定並且安全可靠，製備工藝簡單、成本低廉，適合工業化大生產，有效成分比例更優、含量高、質量高，解決了黃蜀葵花服用劑量大的問題。

2021年6月24日，《黃蜀葵花總黃酮提取物及其製備方法》獲得第二十二屆中國專利銀獎。

基本介紹

• 中文名：黃蜀葵花總黃酮提取物及其製備方法
• 公布號：CN102600219A
• 申請人：江蘇蘇中藥業集團股份有限公司
• 發明人：唐仁茂、徐柏頤、唐海濤、歐陽強、閔文林、周九蘭
• 申請號：2012100825537
• 申請日：2012年3月21日
• 公布日：2012年7月25日
• 地址：江蘇省姜堰市蘇中路1號
• Int. Cl.：A61K36/185(2006.01)I；A23L1/29(2006.01)I；A61P13/12(2006.01)I
• 類別：發明專利

專利背景

黃蜀葵花為錦葵科秋葵屬植物黃蜀葵Abelmoschus Manihot（L.）Medic的乾燥花，黃蜀葵花最早記載於《嘉佑本草》，分布廣泛、資源豐富，《本草綱目》記載：其花氣味甘、寒、滑、無毒，主治小便淋及催生，治諸惡瘡膿水久不瘥者，作末敷之即愈，為瘡家要藥，消疽腫，浸油塗湯火傷等。現代醫學中，黃蜀葵花的主要有效成分是黃酮類成分，截至2012年3月21日，對化學成分的研究也集中於黃蜀葵花總黃酮（Total flavone of A，TFA）及其單體。自20世紀80年代至今已有七個黃酮類單體分離鑑定。研究證明具有降低蛋白尿，減輕紅細胞尿，減輕腎小管間質病變，消除氧自由基，提高紅細胞免疫粘附力，促進人循環免疫複合物（CIC）的轉運與清除，調節細胞免疫功能，抑制體液免疫反應程度，從而減輕人循環免疫複合物（CIC）介導性腎損傷，改善腎功能，達到治療慢性腎炎（CKD）的目的。

藥理研究表明，黃蜀葵花中黃酮類化合物是其主要生物活性成分。進一步的化學研究表明，黃蜀葵花黃酮類化合物（或稱為總黃酮）中以金絲桃苷，異槲皮苷、槲皮素-3′-葡萄糖苷、棉皮素-3′-葡萄糖苷、楊梅素-3-葡萄糖苷、槲皮素-3-洋槐糖苷、棉皮素、楊梅素、槲皮素九種成分含量較多，該九種化合物有以下化學式：

截至2012年3月21日，黃蜀葵花總黃酮提取物的製備方法歸納為三種：

1、先用水或醇提取，將回收溶劑後得到的提取物混懸於水中，分別用氯仿、醋酸乙酯、正丁醇萃取，分成幾個提取部分，再用矽膠柱或葡聚糖凝膠柱層析、分離成單組分物質。

2、用乙醇提取，合併提取液，濾過，濾液濃縮，濃縮液加適量水稀釋，通過大孔樹脂柱或通過聚醯胺柱，用醇水溶液梯度洗脫，洗脫液濃縮，乾燥，粉碎後得總黃酮提取物，如申請號200410035741.X發明專利檔案中所述的黃蜀葵花總黃酮提取物的製備方法。

3、用乙醇提取，合併提取液，提取液減壓濃縮至60攝氏度時比重為1.13-1.16的浸膏，加入沸水分次溶解，靜置，過濾，濾液通過大孔吸附樹脂柱或聚醯胺柱層析，用甲醇洗脫，收集洗脫液；洗脫液減壓濃縮，真空乾燥得黃蜀葵花總黃酮提取物粗品；總黃酮提取物粗品精製，用醋酸乙酯-乙醇提取，回收溶劑，減壓乾燥或真空乾燥得到黃蜀葵花總黃酮提取物，如申請號200610097615.6發明專利檔案中所述的黃蜀葵花總黃酮提取物的製備方法。

不同方法提取得到的提取物中所含黃酮類化合物的種類及其含量均不相同，或者說組成及其重量比例不同的總黃酮，導致其藥理活性、藥性的差異也很大，這就意味著每一種提取方法得到的都是一種新的物質（組合物）。截至2012年3月21日，儘管認為黃酮類化合物是活性成分，但是相關技術仍未確定這些黃酮類化合物中哪些化合物為主要活性成分，該發明通過大量的實驗基本確定了主要的黃酮化合物。該發明進一步最佳化主要活性成分之間的重量比例，截至2012年3月21日，黃蜀葵花總黃酮提取物中黃酮化合物的含量棉皮素-3′-葡萄糖苷＜槲皮素-3′-葡萄糖苷≤異槲皮苷，且棉皮素-3′-葡萄糖苷的含量通常為異槲皮苷或者槲皮素-3′-葡萄糖苷的一半，該發明的黃蜀葵花總黃酮提取物棉皮素-3′-葡萄糖苷的含量基本為異槲皮苷或者槲皮素-3′-葡萄糖苷的2倍以上，同時該發明的提取物在治療腎炎疾病中也獲得了更好的效果。

鑒於上述情況，急需一種有效成分明確、療效更好更穩定並且安全可靠、工藝合理可行、質量穩定的黃蜀葵花總黃酮提取物及其製備方法，適合企業大生產要求，更解決了黃蜀葵花製劑服用劑量大的問題，方便患者、造福患者。

發明內容

專利目的

《黃蜀葵花總黃酮提取物及其製備方法》的目的在於：提供一種有效成分明確、質量更加穩定，有效成分更完全，療效更好更穩定並且安全可靠，製備工藝簡單、成本低廉，適合工業化大生產的黃蜀葵花總黃酮提取物、製劑及其製備方法。通過該發明所述的黃蜀葵花總黃酮製備方法，解決了黃蜀葵花總黃酮提取物的有效成分含量、質量低的問題，特別是該發明製備方法適合工業化大生產，操作簡便、易於控制，產業化生產中運用該發明製備方法，黃蜀葵花提取物的有效成分比例更優、含量高、質量高，解決了黃蜀葵花服用劑量大的問題。

技術方案

為實現《黃蜀葵花總黃酮提取物及其製備方法》的專利目的，該發明提供如下技術方案。

一種黃蜀葵花的總黃酮提取物，含有棉皮素-3′-葡萄糖苷、槲皮素-3′-葡萄糖苷和異槲皮苷，其重量比例為棉皮素-3′-葡萄糖苷：槲皮素-3′-葡萄糖苷：異槲皮苷＝（11-16）：（2.5-6）：（4-6.5）。其中棉皮素-3′-葡萄糖苷：槲皮素-3′-葡萄糖苷：異槲皮苷的重量比例優選為（12-15）：（3-5）：（4-6）或（13-14）：（4-5）：（4-5）或（11-16）：（4-5）：（4-5）或（12-15）：（2.5-6）：（4-6.5）或（12-15）：（4-5）：（4-6.5）。以提取物總重量為基準，按重量百分比，上述提取物中總黃酮含量大於50%。上述提取物還含有槲皮素、槲皮素-3-洋槐糖苷；上述提取物還含有金絲桃苷、棉皮素；上述提取物還含有楊梅素、楊梅素-3-葡萄糖苷。

一種藥物組合物，含有上述黃蜀葵花的總黃酮提取物和藥用可接受載體。作為藥用可接受載體，包括用於固體製劑的各種賦形劑、潤滑劑、粘合劑、崩解劑、穩定劑、發泡劑、包衣劑等，或用於半固體製劑、液體製劑的溶劑、增溶劑、懸浮劑、等滲劑、緩衝劑、潤膚劑、乳化劑等，此外，也可以根據需要使用其它藥用添加劑諸如防腐劑、抗氧化劑、著色劑、甜味劑和調味劑等。具體的，上述藥用可接受載體輔料的例子包括但不限於澱粉、糊精、乳糖、微晶纖維素、羥丙甲基纖維素、聚乙二醇、硬脂酸鎂、滑石粉、硫酸鈣、微粉矽膠、木糖醇、乳糖醇、葡萄糖、甘氨酸、甘露醇、羥丙基-β-環糊精等的一種或一種以上。

上述的藥物組合物，為膠囊劑、片劑、注射劑、溶液劑、糖漿劑、顆粒劑、丸劑、粉劑、膏劑、貼劑、軟膠囊、硬膠囊、或滴丸。上述黃蜀葵花的總黃酮提取物在製備治療腎炎疾病的藥物中的用途。上述藥物組合物在製備治療腎炎疾病的藥物中的用途。上述黃蜀葵花的總黃酮提取物在製備食品、飲料及保健品中的套用。黃蜀葵花的總黃酮提取物，通過添加普通添加劑作為組成成分，可以製成液體的、固體的、粉末狀等各種形態的食品、飲料及保健品。上述黃蜀葵花的總黃酮提取物可以下述方法製備：

1、將黃蜀葵花用6-18倍量（即液固比為6-18毫升/克）的40%-95%乙醇溶液提取1-3次，每次1-4小時，醇提液回收乙醇後濃縮至相對密度在1.10-1.35之間，得濃縮液，根據濃縮液中棉皮素-3′-葡萄糖苷、槲皮素-3′-葡萄糖苷和異槲皮苷的含量，通過向上述濃縮液加入棉皮素-3′-葡萄糖苷、槲皮素-3′-葡萄糖苷或異槲皮苷的單體化合物來調整三者的重量比例至（11-16）：（2.5-6）：（4-6.5）得到該發明的黃蜀葵花的總黃酮提取物。其中棉皮素-3′-葡萄糖苷、槲皮素-3′-葡萄糖苷或異槲皮苷的單體化合物的製備可依據現有技術製備如“黃蜀葵花黃酮成分的研究”，王先榮，周正華等，中國天然藥物，第2卷第2期，第91-93頁，2004年3月中記載的“提取分離”方法部分。該方法中的醇提工藝優選為加入12倍量的60%乙醇，提取2次，每次2小時，濃縮液相對密度為1.15；或加入10倍量的80%乙醇，提取2次，每次1.5小時，濃縮液相對密度為1.20；或加入8倍量的90%乙醇，提取2次，每次1小時，濃縮液相對密度為1.18。

2、將黃蜀葵花用6-18倍量（即液固比為6-18毫升/克）的40%-95%乙醇溶液提取1-3次，每次1-4小時，醇提液回收乙醇後濃縮至相對密度在1.10-1.35之間，得濃縮液，將濃縮液通過矽膠柱，採用氯仿-甲醇梯度洗脫，收集洗脫液濃縮、乾燥、粉碎後得到該發明黃蜀葵花總黃酮提取物。氯仿-甲醇的體積比可依次按20：80、30：70、40：60、50：50、60：40、70：30、80：20進行梯度洗脫，收集氯仿-甲醇的體積比為（30：70）、（50：50）和（80：20）的洗脫液。氯仿-甲醇的體積比也可依次按10：90、25：75、44：66、55：45、67：33、85：15進行梯度洗脫，收集氯仿-甲醇的體積比為（25：75）和（67：33）的洗脫液。根據各部分洗脫液中棉皮素-3′-葡萄糖苷、槲皮素-3′-葡萄糖苷和異槲皮苷的含量，選擇不同的洗脫液進行混合來達到棉皮素-3′-葡萄糖苷、槲皮素-3′-葡萄糖苷或異槲皮苷三者的重量比例至（11-16）：（2.5-6）：（4-6.5）即可。該方法中的醇提工藝優選為加入12倍量的60%乙醇，提取2次，每次2小時，濃縮液相對密度為1.15；或加入10倍量的80%乙醇，提取2次，每次1.5小時，濃縮液相對密度為1.20；或加入8倍量的90%乙醇，提取2次，每次1小時，濃縮液相對密度為1.18。

3、將黃蜀葵花用6-18倍量（即液固比為6-18毫升/克）的40%-95%乙醇溶液提取1-3次，每次1-4小時，醇提液回收乙醇後濃縮至相對密度在1.10-1.35之間，得濃縮液，將濃縮液大孔吸附樹脂或聚醯胺樹脂，先用水洗脫1-5倍柱體積，再用10%-20%乙醇或甲醇溶液洗脫1-4倍柱體積，再用60-80%乙醇或甲醇溶液洗脫1-4倍柱體積，收集60-80%乙醇或甲醇溶液的洗脫液，濃縮乾燥後得到粗提取物，粗提取物用不同比例的醋酸乙酯-乙醇混合液或醋酸乙酯-甲醇混合液依次梯度萃取後，合併部分萃取液後濃縮乾燥。醋酸乙酯-乙醇混合液或醋酸乙酯-甲醇混合液按體積比可依次按18：82，38：62，52：48，68：32進行梯度萃取取，合併體積比（18：82）和（68：32）的萃取液。上述混合液還可以按照不同的體積比進行梯度萃取，根據各部分萃取液中棉皮素-3′-葡萄糖苷、槲皮素-3′-葡萄糖苷和異槲皮苷的含量，選擇不同的萃取液進行混合來達到棉皮素-3′-葡萄糖苷、槲皮素-3′-葡萄糖苷或異槲皮苷三者的重量比例至（11-16）：（2.5-6）：（4-6.5）即可。該方法中的醇提工藝優選為加入12倍量的60%乙醇，提取2次，每次2小時，濃縮液相對密度為1.15；或加入10倍量的80%乙醇，提取2次，每次1.5小時，濃縮液相對密度為1.20；或加入8倍量的90%乙醇，提取2次，每次1小時，濃縮液相對密度為1.18。

大孔吸附樹脂或聚醯胺樹脂洗脫工藝優選為濃縮液以1-3倍柱體積/小時的速度吸附，以1倍柱體積/小時的速度用水洗脫3倍柱體積，再以1倍柱體積/小時的速度用15%乙醇溶液洗脫3倍柱體積，再以1倍柱體積/小時的速度用70%乙醇溶液洗脫4倍柱體積，收集70%乙醇或甲醇溶液的洗脫液。

截至2012年3月21日，黃蜀葵花總黃酮提取物中黃酮化合物的含量棉皮素-3′-葡萄糖苷＜槲皮素-3′-葡萄糖苷≤異槲皮苷，且棉皮素-3′-葡萄糖苷的含量通常為異槲皮苷或者槲皮素-3′-葡萄糖苷的一半，該發明通過了上述製備方法進一步最佳化主要活性成分之間的重量比例，該發明的黃蜀葵花總黃酮提取物棉皮素-3′-葡萄糖苷的含量基本為異槲皮苷或者槲皮素-3′-葡萄糖苷的2倍以上，同時該發明的總黃酮提取物相比有關的黃蜀葵花總黃酮提取物在治療腎炎疾病中也獲得了更好的效果。

改善效果

以下通過試驗例來進一步闡述該發明黃蜀葵花總黃酮提取物及其優選劑型的有益效果：

該發明各組黃蜀葵花總黃酮提取物治療大鼠腎病模型的實驗，實驗動物及分組：雄性SD大白鼠40隻，健康成年（5周齡），體重150±25克/只，江蘇省實驗動物中心提供。適應性餵養7天，按體重隨機分為5組，每組8隻。除空白對照組外，其餘4組均按下述方法製備嘌呤黴素所致大鼠腎病模型。製備動物模型：大鼠分組後第一天，大鼠腹腔一次性注射嘌呤黴素氨基核苷（PAN）100毫克/千克體重。

1）空白對照組：不給任何藥物，亦不造模。

2）病理模型組：按上述方法製備嘌呤黴素所致大鼠腎病模型。

3）對照組：從造模日開始每日一次灌服按照CN200610097615.6實施例1製備的黃葵提取物藥粉，相當於生藥材8.4克/千克·日，連續二周。

4）試驗組1：從造模日開始每日一次灌服該發明實施例1製備的黃葵提取物藥粉，相當於生藥材8.4克/千克·日，連續二周。

5）試驗組2：從造模日開始每日一次灌服該發明實施例2製備的黃葵提取物藥粉，相當於生藥材8.4克/千克·日，連續二周

於造模前、造模第7天、造模第12天、造模第16測定每隻大鼠尿蛋白。實驗結果見下表。

表1 各組尿蛋白定量變化(mg/24hr 均值±SD)

##表示與病理模型組比較P＜0.01；*表示與陽性對照組比較P＜0.05；**表示與陽性對照組比較P＜0.01

結論：通過上述試驗表明，經該發明製得的黃蜀葵花提取物能顯著減輕嘌呤黴素所致大鼠腎病的尿蛋白量，其藥理活性高於利用現有技術生產的黃葵總黃酮。

該發明藥物用於臨床觀察的情況：

1、一般資料：收治門診患者共242例，其中男性128例，女性114例。年齡18-30歲30例，31-40歲32例，41-50歲44例，51-70歲16例。

2、診斷標準

（1）中醫診斷標準：慢性腎炎濕熱證

主症：1）面目或肢體浮腫。2）腰脹痛、熱痛、叩擊痛。3）經常咽痛，乳蛾腫大，或因上感誘發病情加重。4）皮膚癤腫、瘡瘍等，或因皮膚感染誘發病情加重。5）尿深黃，渾濁，泡沫多，血尿，小便灼熱，澀痛不利，或因尿路感染誘發病情加重。6）舌苔黃膩，或舌根黃膩，舌質紅。7）尿膿細胞＞5個/HP，或尿沉渣計數WBC＞40萬/hr。

次症：1）口苦，口臭，口粘，或口乾。2）胸脘痞悶，腹脹，納呆。3）噁心，嘔吐。4）大便溏垢，滯澀不爽，或大便乾結或閉。5）脈濡術，或滑術。6）尿唾液酸（USA）＞90毫克/升。7）尿N-乙醯-β-氨基葡萄糖苷酶（UNAG）＞25U/L。凡具備主症項目1），併兼次症1項以上者；或主症2項以上者；或次症3項以上者，即可診斷為該病症。

（2）西醫診斷標準：慢性腎炎

1）起病緩慢，病情遷延，時輕時重，後期可出現腎功能逐步減退，貧血，電解質紊亂，血BUN、Cr升高等表現。2）有不同程度的蛋白尿、血尿、水腫及高血壓等表現，輕重不一。3）病程中可因呼吸道感染等原因誘發急性發作，出現類似急性腎炎的表現。

（3）慢性腎炎輕重分級標準

病情的輕重主要從蛋白尿、腎功能、水腫、高血壓等方面判斷。凡具備下列任何1項即可確定。

輕度：1）尿蛋白定性檢查持續+～++，或尿蛋白定量持續1克/日以下，腎功能正常；2）浮腫不明顯，血壓正常。

中度：1）尿蛋白定性檢查持續++～+++，或尿蛋白定量持續1～2克/日，腎功能正常；2）浮腫可輕可重，可有高血壓。

重度：1）尿蛋白定性檢查持續+++～++++，或尿蛋白定量持續2.1～3.5克/日（血白蛋白＞30克/升）；2）腎功能異常；3）明顯浮腫及高血壓。

（4）治療方法

試驗組膠囊（按照該發明實施例4製備的膠囊劑）：一次3粒，一日三次。

對照組膠囊（按照CN200610097615.6實施例8製備的膠囊劑）：口服，一次3粒，一日三次。

連續用藥8周。完全緩解、基本緩解的部分比例繼續隨訪治療12周。合併高血壓、糖尿病者，允許繼續使用原先服用的降壓藥。

（5）療效評定標準

1）療效分級

完全緩解：水腫等症狀與體徵完全消失、尿蛋白檢查持續陰性或“±”，或24小時尿蛋白定量持續小於0.2克，高倍鏡下尿紅細胞消失，腎功能正常。

基本緩解：水腫等症狀與體徵基本消失，尿蛋白檢查持續減少50%以上，高倍鏡下尿紅細胞不超過3～5個，腎功能正常或基本正常（與正常值相差不超過15%）。

好轉：水腫等症狀與體徵明顯好轉，尿蛋白檢查持續減少一個+，或24小時尿蛋白定量持續減少25～49%，高倍鏡下尿紅細胞不超過5～8個，腎功能正常或有改善。

無效：臨床表現與上述實驗室檢查均無明顯改善或加重者。

2）不能評價：因病人依從性或其他主、客觀原因無法準確評價療效。

3）比較各主要觀察指標組間及治療前後的變化。

（6）療效分析

表12 經過一個療程治療後療效觀察

從上表所列的結果顯示，試驗組優於對照組，該發明的黃蜀葵花製劑具有良好的治療效果。

以下對該發明黃蜀葵花總黃酮提取物及其製劑的含量測定方法：

依照高效液相色譜法（中國藥典2005年版一部附錄VI D）測定。

色譜條件與系統適應性試驗用十八烷基鍵合矽膠為填充劑，檢測波長360納米；柱溫：室溫；流動相：乙腈（A）-2%醋酸（B），梯度：0分鐘：A-16%，B-84%，20分鐘：A-16%，B-84%，30分鐘：A-20%，B-80%，40分鐘：A-16%，B-84%。

理論板數以各主峰計不得低於5000。金絲桃苷和異槲皮苷的分離度大於1.5，槲皮素-3’-葡萄糖苷和棉皮素-3′-葡萄糖苷分離度良好。對照品溶液的製備：取金絲桃苷對照品、異槲皮苷對照品和槲皮素-3’-葡萄糖苷對照品適量，加甲醇製成100微克/毫升、40微克/毫升、40微克/毫升的溶液；另取棉皮素-3′-葡萄糖苷對照品適量，加流動相製成80微克/毫升的濃度。

供試品溶液的製備：取該品裝量差異項下的內容物，研細，取0.1克，精密稱定，置25毫升量瓶中，加甲醇約15毫升，超聲處理30分鐘（頻率40千赫茲，功率100瓦，電源220伏）。放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

測定法：分別精密吸取各對照品溶液與供試品溶液各10微升，注入液相色譜儀，測定，按照外標法計算即得。

總黃酮含量的測定採用AlCl3絡合比色法進行測定，該品含總黃酮（以蘆丁計）為50-90%。

該發明提取物中槲皮素、槲皮素-3-洋槐糖苷、棉皮素、楊梅素和楊梅素-3-葡萄糖苷採用LC-MS色譜定性分析，LC-MS色譜條件：1、液相色譜條件：色譜柱：Hypersil ODS C18柱（150毫米×4.6毫米，5微米）；檢測波長：358納米；流動相：甲醇-水-冰醋酸（60：40：0.5），流速：0.5毫升/分鐘，柱溫：室溫，進樣量：50微升。2.質譜條件電噴霧（ESI）離子源，其噴射電壓為4500電子伏特；霧化氣（N2）壓力50磅/平方英寸，流速為50流量單位（a.u.），乾燥氣（N2）流速為10a.u.；正負離子全掃描模式。將所得結果與現有質譜數據比對分析。

技術領域

《黃蜀葵花總黃酮提取物及其製備方法》技術屬於中藥製藥領域，具體涉及一種黃蜀葵花提取物、製劑及其製備方法，該黃蜀葵花提取物可用於藥品、保健品和食品。

權利要求

1、一種黃蜀葵花的總黃酮提取物，其特徵在於所述提取物含有棉皮素-3′-葡萄糖苷、槲皮素-3′-葡萄糖苷和異槲皮苷，其重量比例為棉皮素-3′-葡萄糖苷：槲皮素-3′-葡萄糖苷：異槲皮苷＝（11-16）：（2.5-6）：（4-6.5）。

2、如權利要求1所述的黃蜀葵花的總黃酮提取物，其特徵在於以提取物總重量為基準，按重量百分比，所述提取物中總黃酮含量大於50%。

3、如權利要求1所述的黃蜀葵花的總黃酮提取物，其特徵在於所述提取物還含有槲皮素、槲皮素-3-洋槐糖苷。

4、如權利要求1所述的黃蜀葵花的總黃酮提取物，其特徵在於所述提取物還含有金絲桃苷。

5、如權利要求1所述的黃蜀葵花的總黃酮提取物， 其特徵在於所述提取物還含有楊梅素、楊梅素-3-葡萄糖苷、棉皮素。

6、一種藥物組合物，其特徵在於：所述組合物由權利要求1~5任意一項所述的黃蜀葵花的總黃酮提取物和藥用可接受載體組成。

7、如權利要求6所述的藥物組合物，其特徵在於：所述組合物為膠囊劑、片劑、注射劑、溶液劑、糖漿劑、顆粒劑、丸劑、粉劑、膏劑或貼劑。

8、如權利要求7所述的藥物組合物，其特徵在於：所述膠囊劑為軟膠囊或硬膠囊，所述丸劑為滴丸劑。

9、如權利要求1~5任意一項所述的黃蜀葵花的總黃酮提取物在製備治療腎炎疾病的藥物中的用途。

10、如權利要求6~8任意一項所述的藥物組合物在製備治療腎炎疾病的藥物中的用途。

實施方式

以下通過實施例來進一步闡述該發明黃蜀葵花總黃酮提取物及其製劑的製備方法。

黃蜀葵花為錦葵科（Malvaceae）秋葵屬植物黃蜀葵Abelmoschus Manihot（L.） Medic的乾燥花。黃蜀葵花原料由江蘇蘇中藥業集團股份有限公司黃蜀葵GAP種植基地提供，其他原料均為市售，且符合中華人民共和國藥典2010年版一部“黃蜀葵花”項下的標準。

實施例1：黃蜀葵花總黃酮提取物的製備，該發明原料藥材黃蜀葵花2000克

黃蜀葵花用8倍量的95%的乙醇，回流提取2次，每次1小時，過濾，合併濾液回收乙醇至盡，濃縮濾液至比重1.20，濃縮液在0攝氏度～4攝氏度靜置24～48小時，調pH值6.0，將冷藏液採用薄層快速乾燥，即得黃蜀葵花粗提取物。

上述提取物按重量百分比總黃酮含量達到55.0%，其中所述總黃酮提取物含有：金絲桃苷1.20%、異槲皮苷1.50%、槲皮素-3’-葡萄糖苷1.00%、棉皮素-3’-葡萄糖苷0.9%。取適量上述粗提取物，加入槲皮素-3’-葡萄糖苷和棉皮素-3’-葡萄糖苷調整至棉皮素-3′-葡萄糖苷：槲皮素-3′-葡萄糖苷：異槲皮苷的重量比例為16：4：4，經LC-MS色譜鑑定該提取物中還含有槲皮素、槲皮素-3-洋槐糖苷、棉皮素、楊梅素和楊梅素-3-葡萄糖苷。

實施例2：黃蜀葵花總黃酮提取物的製備，該發明原料藥材黃蜀葵花1000克

黃蜀葵花用10倍量的85%的乙醇，回流提取3次，每次2小時，過濾，合併濾液回收乙醇至盡，濃縮濾液至比重1.35，將濃縮液通過矽膠柱，採用氯仿-甲醇梯度洗脫，收集洗脫液濃縮、乾燥、粉碎後得到黃蜀葵花總黃酮提取物。氯仿-甲醇的體積比可依次按20：80、30：70、40：60、50：50、60：40、70：30、80：20進行梯度洗脫3倍柱體積，收集氯仿-甲醇的體積比為（30：70）、（50：50）和（80：20）的洗脫液。

上述提取物按重量百分比總黃酮含量達到79.0%，其中所述總黃酮提取物含有：金絲桃苷2.30%、異槲皮苷0.6%、槲皮素-3’-葡萄糖苷0.52%、棉皮素-3’-葡萄糖苷1.46%，經LC-MS色譜鑑定該提取物中還含有槲皮素、槲皮素-3-洋槐糖苷、棉皮素、楊梅素和楊梅素-3-葡萄糖苷。

實施例3：黃蜀葵花總黃酮提取物的製備，該發明原料藥材黃蜀葵花800克

黃蜀葵花用12倍量的90%的乙醇，回流提取2次，每次2小時，過濾，合併濾液回收乙醇至盡，濃縮濾液至比重1.20，濃縮液過AB-8大孔吸附樹脂，先用水以洗脫4倍柱體積，再以1倍柱體積/小時的速度用15%乙醇溶液洗脫3倍柱體積，再以1倍柱體積/小時的速度用70%乙醇溶液洗脫3倍柱體積，收集70%乙醇溶液的洗脫液，濃縮乾燥後得到粗提取物，粗提取物用醋酸乙酯-乙醇混合液按體積比可依次按18：82，38：62，52：48，68：32進行梯度萃取取，合併體積比（18：82）和（68：32）的萃取液，然後濃縮乾燥。

上述提取物按重量百分比總黃酮含量達到82.0%，其中所述總黃酮提取物含有：金絲桃苷2.40%、異槲皮苷0.55%、槲皮素-3’-葡萄糖苷0.48%、棉皮素-3’-葡萄糖苷1.5%，經LC-MS色譜鑑定該提取物中還含有槲皮素、槲皮素-3-洋槐糖苷、棉皮素、楊梅素和楊梅素-3-葡萄糖苷。

實施例4：黃蜀葵花總黃酮提取物膠囊

黃蜀葵花總黃酮提取物（實施例3方法製得）400克，羥丙基纖維素20克，滑石粉15克，微晶纖維素20克，硫酸鈣20克，無水乙醇適量。

將黃蜀葵花提取物粉碎後，加入上述重量份的羥丙基纖維素、滑石粉、微晶纖維素、硫酸鈣混勻，過80目篩，加入適量的無水乙醇，制軟材，再用20目篩制顆粒，乾燥，整粒，裝膠囊，共製成1000粒。

實施例5：黃蜀葵花總黃酮提取物顆粒

黃蜀葵花總黃酮提取物（實施例2方法製得）400克，滑石粉15克，微晶纖維素20克，糖粉10克，3%聚維酮乙醇溶液適量。

將黃蜀葵花提取物粉碎後，加入上述重量份的微晶纖維素、糖粉混合均勻，加3%聚維酮乙醇溶液適量制軟材，過18目篩，60攝氏度乾燥30～45分鐘，整粒，加入滑石粉，混勻，整粒，裝袋，共製成1000袋。

實施例6：黃蜀葵花總黃酮提取物片

黃蜀葵花總黃酮提取物（實施例1方法製得）400克，糊精15克，微晶纖維素20克，低取代羥丙甲纖維素20克，硬脂酸鎂20克，無水乙醇適量。

將黃蜀葵花提取物、低取代羥丙甲纖維素、硬脂酸鎂分別粉碎過80目篩後，混合均勻，加無水乙醇溶液適量制軟材，過20目篩，60攝氏度乾燥30～45分鐘，整粒，加入微晶纖維素，混勻，壓片，共壓1000片。

實施例7：黃蜀葵花總黃酮提取物滴丸

黃蜀葵花總黃酮提取物（實施例3方法製得）400克，蜂蠟40克，液體石蠟40克，食用植物油150克，明膠40克，甘油10克，注射用水適量。

將黃蜀葵花提取物與經過加熱滅菌、澄清的食用植物油及蜂蠟熔融物混合，充分攪勻即得囊心物。取明膠加入適量水使其膨脹，將甘油與適量的注射用水置煮膠鍋中加熱至70攝氏度～80攝氏度，混合均勻，加入膨脹的明膠攪拌，熔化，保溫，靜置1-2小時，除去上層的泡沫，乘熱過濾，置於明膠槽中，溫度60攝氏度，將黃蜀葵花提取物緩緩加入明膠槽內；液體石蠟溫度以25攝氏度為宜，室溫15攝氏度～20攝氏度，滴頭溫度50攝氏度～60攝氏度，開始滴丸。滴出的膠丸均勻攤於紗網傳送帶上，10攝氏度低溫吹風6小時，去除膠丸表面石蠟，10攝氏度低溫吹風24小時，45攝氏度乾燥12小時，去除廢丸，檢驗合格後，包裝。

實施例8：黃蜀葵花總黃酮提取物注射液

黃蜀葵花提取物（實施例3方法製得）400克，羥丙基-β-環糊精225克，甘露醇115克，注射用水適量。

將黃蜀葵花提取物粉碎後，羥丙基-β-環糊精225克攪拌混勻，加入5倍量的注射用水，攪拌，60攝氏度攪拌1～2小時，加入甘露醇115克，攪拌使溶解，調pH值7.0，加注射用水至總體積，繼續攪拌10分鐘後，超濾，濾液灌裝於西林瓶中，冷凍乾燥，壓塞、加蓋，即得。

專利榮譽

2021年6月24日，《黃蜀葵花總黃酮提取物及其製備方法》獲得第二十二屆中國專利銀獎。