《魚類樹突狀抗原遞呈細胞的分子表型與功能研究》是依託浙江大學，由邵健忠擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：魚類樹突狀抗原遞呈細胞的分子表型與功能研究
- 依託單位：浙江大學
- 項目負責人：邵健忠
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
本項目擬在申請者已有工作的基礎上，將經濟養殖魚類和模式魚類相結合，首次在魚類中開展樹突狀抗原遞呈細胞標誌基因克隆、分子表型鑑定和免疫學功能研究，闡明魚類是否存在DC-SIGN+CD80+CD83+MHCII+表型特徵的樹突狀細胞亞群及相關適應性免疫啟動機制；研究共刺激分子CD80/86在魚類樹突狀細胞激活適應性免疫中的作用，探討炎症信號對樹突狀細胞啟動適應性免疫的必要性以及特異性免疫因子對樹突狀細胞的反饋調節作用，揭示天然免疫與適應性免疫的相互關係。研究結果不僅可以豐富魚類免疫學內容，為魚類疫苗及其分子佐劑的合理開發套用、提高魚類疫苗接種的免疫效率等提供理論基礎和指導，同時也為脊椎動物適應性免疫系統及其細胞和分子調控機制的起源進化研究，提供科學依據。
結題摘要
樹突狀細胞（Dendritic cell, DC）是最重要的專職抗原呈遞細胞。作為天然免疫的重要組成部分以及聯繫天然和適應性免疫的紐帶，DC廣泛參與機體免疫激活、免疫耐受、腫瘤和自身免疫疾病發生等過程，是免疫學最活躍的研究領域之一。當前對DC的研究主要見諸人類和哺乳動物，魚類中的研究尚處於起步階段。本項目系統開展了魚類DC表面標誌分子、特異性轉錄因子以及生長調節因子的分離鑑定，成功地從斑馬魚等魚類中分離鑑定出DC-SIGN/CD209、CD80/86、CD83、Tim-4和MHC II等重要表面標誌分子、zbtb46特異性轉錄因子以及IL-4等關鍵生長調節因子及其受體（IL-4Rα）分子，分析了這些分子的結構特徵。通過研製DC標誌分子和調節因子重組蛋白及特異性抗體、構建慢病毒載體介導的DC基因敲除技術以及DC標誌基因啟動子介導的螢光報告示蹤技術，建立了魚類DC表型和功能研究的實驗體系。通過mIgM和DC-SIGN抗體偶聯的MACS正負雙向分選技術，成功地從實驗魚外周血、脾臟和腎臟組織中分離出DC，流式細胞術分析顯示所分離的DC集中分布於髓系細胞群體中。經IL-4增殖分化的DC培養細胞呈現典型的樹突狀形態，其比例達到70%以上。利用一系列白細胞標誌分子（包括B細胞mIgM、T細胞TCRα/TCRβ、DC細胞MHC II、CSF-1R和IL-12p40、單核/巨噬細胞mpeg1、嗜酸性粒細胞Gata2、嗜中性粒細胞mpx、肥大細胞cpa5及紅細胞Gata1）等對分離的DC進行鑑定，結果顯示其主要表達MHC II、CSF-1R和IL-12p40，而基本不表達其他白細胞標誌分子。免疫組化和螢光報告質粒顯示，魚類DC呈現DC-SIGN+CD80+CD83+Tim-4+MHCII+IgM—表型特徵。功能研究表明，魚類DC能夠顯著活化抗原（KLH）反應性Naïve CD4+ Th細胞（CD4+ TKLH），而DC表面分子CD80/86、CD83和DC-SIGN在CD4+ Th細胞活化中發揮重要作用。研究結果豐富了魚類免疫學內容，為魚類疫苗及其分子佐劑的開發套用以及提高魚類疫苗接種的免疫效率等提供了理論指導，同時也為脊椎動物適應性免疫系統及其細胞和分子調控機制的起源進化研究，提供了科學依據。
