高遷移率族蛋白B1在J亞群禽白血病病毒致病中的作用

《高遷移率族蛋白B1在J亞群禽白血病病毒致病中的作用》是依託揚州大學，由錢琨擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：高遷移率族蛋白B1在J亞群禽白血病病毒致病中的作用
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：錢琨
• 依託單位：揚州大學

項目摘要

高遷移率族蛋白B1（high mobility group protein B 1, HMGB1）是高遷移率族蛋白家族成員之一，與人類多種腫瘤疾病的發生、發展相關。本課題組在蛋白質組學研究中發現感染J亞型禽白血病病毒（ALV-J）細胞中的HMGB1顯著升高。為深入了解HMGB1 在ALV-J致病過程中可能的生物學功能，本項目擬通過觀察ALV-J感染後chHMGB1的動態變化，明確chHMGB1與病毒複製的關係，測定病毒感染細胞中chHMGB1對細胞活力和生長的影響及可能的轉化細胞能力，確定chHMGB1在病毒感染細胞內信號傳導分子機制，從而為明確ALV-J的致病機制提供理論依據。

結題摘要

高遷移率族蛋白B1在多種動物腫瘤疾病發生髮展過程中發揮作用，通過三年的研究，本課題取得了預期的研究結果，揭示了chHMGB1在J亞群禽白血病病毒感染過程中的作用。主要研究結果如下：1. chHMGB1基因的克隆，表達載體的構建及蛋白純化鑑定。擴增chHMGB1基因，並成功克隆到原核及真核達載體中。國內外首次在體外表達了chHMGB1重組蛋白，並進行了純化鑑定。2. chHMGB1特異性抗體的製備。課題組製備得到親和層析純化的多克隆抗體和特異性的單克隆抗體。製備的抗體能特異性識別天然的chHMGB1，為chHMGB1的研究提供了重要的生物試劑。3. chHMGB1檢測方法的建立及套用。首次建立了家禽chHMGB1的雙夾心ELISA方法和螢光定量PCR方法。檢測正常雞組織和細胞中chHMGB1基因的表達水平，從而為進一步研究chHMGB1在家禽疾病免疫調節和炎症過程中的生物學作用提供了一種快速、可靠的檢測方法。4. 病毒感染狀態下，chHMGB1在體內外細胞和組織中的動態變化。課題對J亞群禽白血病毒感染的細胞和動物組織中的chHMGB1進行了動態的觀察和記錄。體外細胞實驗總體而言沒有非常明顯的規律可循；體內試驗發現腎臟中chHMGB1與病毒基因的變化趨勢基本一致，而在肝組織中chHMGB1基因與病毒基因的表達一直處於一個波動的狀態。 病毒感染和脂多糖刺激細胞中chHMGB1蛋白定位結果提示不同物種的高遷移率族蛋白B1可能具有不同的生物學功能或不同的作用途徑和方式。5. J亞群病毒感染HD11細胞誘導功能性chHMGB1釋放。首次發現ALV-J能夠誘導病毒感染的HD11細胞發生凋亡。在細胞發生凋亡的同時將細胞內的chHMGB1釋放，有效的刺激外周血單核細胞合成TNFα，進一步引起病毒感染細胞的凋亡。6. chHMGB1對J亞群禽白血病病毒複製的影響。結果表明， pcDNA3.1-chHMGB1暫態表達抑制ALV-J在細胞中的複製；chHMGB1功能性抑制劑作用於細胞後，病毒複製能力增強；純化chHMGB1添加到細胞培養中，病毒複製能力略有下降，但差異不顯著。總體而言，chHMGB1增加會抑制ALV-J病毒的複製。以上主要研究成果為全面揭示J亞群禽白血病病毒的致病機制提供理論依據。