《高致病性禽流感病毒NS1相互作用蛋白的鑑定及功能驗證》是依託中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院，由劉坤擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：高致病性禽流感病毒NS1相互作用蛋白的鑑定及功能驗證
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：劉坤
- 依託單位：中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
2009年以來我國多地散發禽流感H5N1感染致死事件引起大家廣泛關注，其致病病原-禽流感H5N1病毒的致病機理仍未知。目前研究提示NS1蛋白在病毒致病進程中發揮重要作用，而其發揮作用主要通過與宿主蛋白的相互作用實現。因此，本研究擬選擇禽流感病毒研究常用的人Ⅱ型肺上皮細胞-A549為模型，以常用弱毒株PR8病毒作為骨架、拯救NS1基因替換為高致病性禽流感HK/97 NS1基因的重組病毒PR8/HK-NS1，通過2D BN-PAGE鑑定和分析與NS1相關的蛋白複合體；同時，以HK/97 NS1蛋白為誘餌，通過經典免疫共沉澱和pull-down的方法釣取並鑑定NS1相互作用蛋白，兩種策略並行以求獲得新的NS1相互作用功能蛋白，通過進一步對其相互作用蛋白功能的探索，從而為闡明高致病性禽流感NS1在病毒與宿主相互作用中的作用機制提供新的線索。
結題摘要
流感給人類健康和社會經濟造成巨大的危害，但其致病機理仍未知。以往研究發現，流感NS基因在其致病過程中可能發揮了重要的作用。因此，本研究擬以人II-型肺上皮細胞A549為模型，尋找NS蛋白的相互作用蛋白，初步闡明NS基因在流感病毒與宿主相互作用中的機制。對項目取得的成績做簡單概述如下： 1. 重組NS基因新型甲型H1N1流感病毒的檢定。我們從臨床H1N1/09感染病人咽拭子樣本中分離、鑑定到一株甲型流感病毒，其重組了NS（HK/97/483），並對其進行了體內、體外檢定。我們擴增了該病毒的全部基因並進行了測序，經序列比對，發現其為一株H1N1流感病毒，重組的NS基因來源自HK/97/483(H5N1)；經體外方法分析了該病毒在不同細胞中的生長曲線；經感染小鼠，分析了該病毒對小鼠的致病。結果發現該病毒可引起小鼠多器官病毒感染，造成小鼠肺細胞因子異常，這與報導的H5N1流感病毒類似。 2. NS對A549細胞凋亡的影響及機理。經對NS相互作用蛋白的數據分析，我們發現有很多凋亡相關蛋白。將NS轉染A549細胞後，發現NS誘導了A549細胞的凋亡；對A549細胞的凋亡誘導依賴於對NF-kB信號通路的抑制。
