《高密度脂蛋白受體(SR-BI)的泛素化修飾及功能研究》是依託南京師範大學，由胡志剛擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：高密度脂蛋白受體(SR-BI)的泛素化修飾及功能研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：胡志剛
- 依託單位：南京師範大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
膽固醇是人體內膽汁酸，維生素，類固醇激素合成的主要原材料。高密度脂蛋白(HDL)的轉運對於防止膽固醇在動脈壁沉積，並將膽固醇從血管壁運送至肝臟具有關鍵性的作用。高密度脂蛋白受體(SR-BI)能夠選擇性攝入與高密度脂蛋白相結合的膽固醇酯，在膽固醇逆向轉運和類固醇激素分泌調節中具有非常重要作用。泛素化與腫瘤、心血管等疾病的發病密切相關。我們的前期預實驗發現SR-BI能夠被泛素化調節，NHERF1和NHERF2能夠上調SR-BI的泛素化水平。前人報導PDZK1能調節SR-BI蛋白穩定性。本項目中，我們將進一步研究SR-BI泛素化調節的機制，研究PDZK1與NHERF1/2對SR-BI蛋白的作用機制，揭示NHERF1/2調節SR-BI泛素化的分子機制及PDZK1上調SR-BI細胞內蛋白水平的機理。本研究將為SR-BI的功能解析提供重要依據，對研究膽固醇代謝和類固醇激素分泌具有非常重要的意義
結題摘要
高密度脂蛋白受體(SR-B1)向細胞內選擇性攝入與高密度脂蛋白相結合的膽固醇酯，從而在體內膽固醇平衡、類固醇激素合成和脂代謝調節中發揮重要作用。SR-B1的表達和功能受到轉錄、轉錄後和翻譯後等不同水平的調節。泛素化修飾是一種體內廣泛存在的、酶促的蛋白質翻譯後修飾過程，與腫瘤、心血管等疾病的發病密切相關。本項目利用生化和細胞生物學實驗方法研究證明高密度脂蛋白受體SR-B1存在泛素化修飾，並通過泛素化-蛋白酶體途徑降解。通過構建突變表達質粒和截短體表達質粒，我們研究發現了SR-B1受體的泛素化修飾位點在其第500位和508位賴氨酸殘基上。我們和其他研究者早期已發表的研究發現PDZ家族的蛋白PDZK1能夠上調肝臟細胞中SR-B1的蛋白含量，而另外兩個蛋白NHERF1和NHERF2則能夠下調細胞內SR-B1的蛋白含量。所以，我們在本項目中進一步研究這三個蛋白對SR-B1的泛素化修飾水平的潛在影響。通過實驗研究發現PDZK1蛋白能夠上調SR-B1的細胞內蛋白含量，但是不能改變SR-B1的泛素化水平。而過表達另外兩個蛋白NHERF1和NHERF2能夠上調SR-B1的泛素化水平從而進一步促進細胞內SR-B1的蛋白質降解，並且發現了兩者作用的泛素化位點分別為SR-B1的第508位和第500位胺基酸殘基。此外，我們在本項目研究中還證明了SR-B1存在類泛素化修飾(SUMO)，並且發現了一種類泛素化依賴的泛素化E3連線酶RNF111能夠作用並下調SR-B1的細胞內蛋白含量。其次，本項目通過PULL-DOWN和質譜實驗，研究獲得大量與SR-B1潛在作用的蛋白，其中發現一種新的蛋白GIPC1能夠上調SR-B1的含量。綜上，本項目研究SR-B1的泛素化修飾及調控機制，闡明了NHERF1 、NHERF2和PDZK1對SR-B1泛素化修飾的影響。同時還發現了一種新的PDZ家族蛋白GIPC1對SR-B1存在作用。本項目的研究成果對進一步了解高密度脂蛋白受體SR-B1在體內的蛋白穩定性和功能調控提供了證據，並對體內的膽固醇平衡和脂代謝調控的理論研究提供了一定的研究基礎，進而為高膽固醇血症和脂代謝紊亂性疾病提供了新的理論研究和潛在的藥物作用靶點。
