靶向腎癌幹細胞的特異性免疫治療研究

《靶向腎癌幹細胞的特異性免疫治療研究》是依託中山大學，由翁德勝擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：靶向腎癌幹細胞的特異性免疫治療研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：翁德勝
• 依託單位：中山大學

中文摘要

腎癌幹細胞靶向免疫治療研究國內外尚未見有相關報導。本項目在前期研究基礎上，採用乙醛脫氫酶（ALDH）為標誌物，從腎癌細胞系和原代培養的腎癌細胞中分離腎癌幹細胞，並對其腫瘤幹細胞特性進行鑑定。利用分離鑑定的腎癌幹細胞，提取抗原，負載樹突狀細胞（DC）後，誘導針對腎癌幹細胞的特異性細胞毒T淋巴細胞（CTL）生成，並在體外（免疫細胞學實驗）、體內（小鼠模型實驗）驗證其靶向殺傷腎癌幹細胞的特異性，同時進行機制分析。通過本研究，我們以免疫特異性識別的特性，建立腎癌幹細胞靶向性免疫治療的新方法，從而有效提高腎癌免疫治療的效果。本項目研究成果將為臨床提供更特異、更有效的腫瘤輔助治療手段，有望成為腎癌綜合治療的新方法，對於腎癌患者術後的鞏固療效、抑制復發和轉移、改善預後具有積極意義。

結題摘要

腫瘤幹細胞（CSC）與腫瘤的發生、發展密切相關，並且對傳統治療方法如化療、放療的敏感性較差，可能導致腫瘤復發。理想的治療策略是選擇性地靶向和破壞CSC，從而預防腫瘤復發。本研究的目的是評估樹突狀細胞（DC）負載CD105+腎癌幹細胞相關抗原對腎癌的治療作用，從體內外實驗驗證其作用及可能機制。 我們在兩種人RCC細胞系A498和SK-RC-39中分離得到CD105+細胞，發現CD105+腎癌幹細胞幹細胞相關基因，OCT-4A，SOXN，NAONG，ABCG2和C-MYC等的表達較CD105-組腎癌細胞顯著增高。CD105+腎癌幹細胞能夠形成結構緻密且體積較大的球囊。至少需要注射劑量為1×10E6的CD105-腎癌細胞才能可以在BALB/c雌裸鼠腋窩皮下成瘤。然而1×10E4的CD105+ 腎癌幹細胞就能成瘤。並且CD105+腎癌細胞在裸鼠體內成瘤的速度要顯著高於CD105-腎癌細胞。將分選得到的CD105+和CD105-腎癌細胞裂解物負載DC細胞，得到DC疫苗。CD105+CTLs對CD105+腎癌幹細胞有比較強的特異性殺傷能力。體內實驗表明CD105+CSC-CTLs組的腫瘤生長明顯受到抑制，流式和免疫組化發現這組腫瘤內CD105+的細胞明顯減少，說明CD105+CSC-CTLs能特異性殺傷CD105+的腎癌幹細胞。只有負載CD105+腎癌幹細胞裂解物抗原的DCs誘導的CTLs細胞（CD105+_CTLs）才能特異性的與MHC-CD105肽四聚體結合。CD105+CTLs，CD105-CTLs，unsorted-CTLs分泌的IFN-γ、TNF-α、GranzymeB、Perforin的量較Con-CTLs顯著升高，但這三組之間沒有顯著性差異。負載CD105+腎癌幹細胞裂解物抗原的DCs疫苗能夠刺激B淋巴細胞產生更多的能與CD105+腎癌幹細胞結合的特異性抗體。 實驗結果表明，負載CD105+ CSC裂解物並不會改變DC 本身的物性，但可以誘導抗CSC的特異性殺傷作用，並可產生特異性抗體，在體內可明顯抑制小鼠腫瘤生長。我們的研究結果可以為一種新的腫瘤免疫治療策略奠定基礎。