《雞球蟲共同抗原的確認及免疫原性分析》是宋小凱為項目負責人，南京農業大學為依託單位的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：雞球蟲共同抗原的確認及免疫原性分析
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：宋小凱
- 依託單位：南京農業大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
雞球蟲病是嚴重危害養禽業的疾病之一。藥物防治受到耐藥性蟲株和藥物殘留等問題的限制，傳統活苗存在著易散毒、成本居高、難保存等缺點，其使用也受到了限制。作為新型疫苗，DNA疫苗和亞單位疫苗以其獨特的優勢顯示其在畜禽疫病控制中的誘人前景。有效的疫苗須能抵抗臨床上常見的混合感染，因此，多種球蟲共同抗原的發掘顯得十分迫切和必要。為發掘雞球蟲共同抗原，本研究通過二維電泳技術分離4種球蟲子孢子階段蛋白，分別用感染球蟲雞血清篩選免疫原性抗原蛋白，比較4種球蟲子孢子蛋白點，選擇相同的蛋白點進行質譜分析，確定共同抗原，將共同抗原基因進行克隆並構建真核和原核表達質粒，用共同抗原重組蛋白和真核表達質粒免疫雞，分別從體液免疫水平、細胞免疫水平和免疫保護性研究共同抗原的免疫原性，確定共同抗原的免疫原性，選出具有良好免疫原性的真核質粒或重組蛋白作為雞球蟲病候選DNA疫苗或亞單位疫苗，為解決雞球蟲混合感染提供參考。
結題摘要
雞球蟲在臨床上往往為混合感染，雞球蟲病每年給全球養禽業帶來超過30億美元的經濟損失。目前，主要防控措施是使用抗球蟲藥和傳統活卵囊疫苗，然而藥物存在著耐藥性、藥物殘留等缺點，活疫苗又存在成本居高和易散毒等問題，其使用受到了限制。新型疫苗DNA疫苗和亞單位疫苗研究以其獨特的優勢顯示其在畜禽疫病控制中的誘人前景。有效的疫苗須能抵抗臨床上常見的混合感染，因此，多種球蟲共同抗原的發掘顯得十分迫切和必要。為發掘雞球蟲共同抗原，本研究通過二維電泳技術分離3種球蟲孢子化卵囊蛋白，分別用感染球蟲雞血清篩選免疫原性抗原蛋白，對3種球蟲的蛋白點進行質譜分析，進行線上比對，將胺基酸序列同源性在3個種之間在90%以上的抗原確定為共同抗原，將共同抗原基因進行克隆並構建真核表達質粒pVAX1.0，並免疫雞，分別從細胞免疫水平和免疫保護性研究共同抗原的免疫原性。結果顯示E. tenella、E. acervulina和E. maxima分別有50個、64個和57個蛋白點能被雞抗球蟲血清識別，表明這些蛋白具有良好的抗原性。其中延長因子2在3個種之間蛋白序列同源性為99%，遍在蛋白綴合酶結構域在3個種之間的蛋白序列分別為97%，99%和100%，14-3-3蛋白在3個種之間的蛋白序列同源性分別為96.5%，96.7%和94.1%，延長因子1-α在3個種之間的蛋白序列相似性分別為在95%，96%和98%，3-磷酸甘油醛脫氫酶在3個種之間的蛋白序列同源性分別為96%，91%和93 %。對遍在蛋白綴合酶結構域，14-3-3蛋白和3-磷酸甘油醛脫氫酶的免疫原性和免疫保護性進行了研究。結果表明，上述3種共同抗原所構建的真核表達質粒能夠顯著促進CD4+和CD8+淋巴細胞的增殖，有效促進IFN-γ、IL-2等細胞因子的分泌，說明上述共同抗原能有效地誘導雞體的細胞免疫反應。動物免疫保護實驗結果顯示，14-3-3蛋白和3-磷酸甘油醛脫氫酶免疫組的抗球蟲指數都在160之上，說明上述2種共同抗原能夠有效地抵抗3個種的單獨感染和混合感染。而遍在蛋白綴合酶結構組的免疫保護效果不明顯。總之，本研究篩選到了3種球蟲的3個共同抗原，都具有良好的免疫原性，其中2種共同抗原種能夠抵抗3種球蟲的混合感染。本研究為多價新型疫苗的研製提供了有效的候選抗原，為解決雞球蟲混合感染提供參考。
