《鐵過載加劇高糖環境中血管內皮細胞損傷及機制研究》是依託南昌大學，由何明擔任項目負責人的地區科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：鐵過載加劇高糖環境中血管內皮細胞損傷及機制研究
- 項目類別：地區科學基金項目
- 項目負責人：何明
- 依託單位：南昌大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
在總結前人與自身工作基礎上，我們假設：亞損傷濃度鐵與糖生成的ROS協同抑制DDAHⅡ活性，ADMA滅活與NO生成減少，且經NOS脫偶在線上制，ROS惡性生成，RIRR激活，mPTP過度開放，導致內皮細胞功能衰竭；牛磺酸等可對抗之。擬在HUVECs上確認亞損傷濃度鐵與糖協同損傷，測定細胞ADMA含量及eNOS表達/活性、ROS含量、線粒體膜電位（Δψ）、mPTP開放、細胞凋亡等；構建DDAHⅡ重組腺病毒並轉染HUVECs，或用牛磺酸等干預，重複上述實驗；最後建立STZ亞糖尿病大鼠模型，評估亞損傷濃度鐵與糖協同加重糖尿病相關狀況，取模型大鼠大、小、微血管檢測血管功能及內皮細胞損害情況，以及牛磺酸干預之療效。本研究可望探討、闡明亞損傷濃度的鐵與糖協同誘發糖尿病、協同損傷血管內皮細胞之分子生物學機制，為改善人們，特別是糖尿病高危人群的膳食結構，尋找相關血管病變分子靶點，開發相關藥物拓展新的思路。
結題摘要
緊扣“ROS”之關鍵，以“鐵、糖均可引起ROS過量形成，進而抑制DDAHⅡ，使ADMA滅活與NO生成減少，激活RIRR機制，誘發ROS爆發，mPTP過度開放，導致內皮細胞功能衰竭”為主線，本項目完成了腺病毒載體pAD/DDAHⅡ構建及轉染細胞相應蛋白測定；確認HUVECs亞損傷糖/鐵濃度分別為5 mM/1.875μM，最佳比例為0.5/0.5；二者協同作用可使細胞存活率顯著降低，ROS生成增加，SOD/GSH-Px/Catalas及GSH活性/含量降低，MDA/GSSG含量增加，線粒體膜電位減少，mPTP開放、最終細胞凋亡；其機制與糖/鐵協同作用造成ROS惡性生成，DDAHⅡ/ADMA/eNOS/NO通路紊亂， RIRR機制激活，誘發線粒體功能衰竭有關。 本項目完成了整體大鼠驗證實驗：給予亞損傷劑量的10 mg/kgSTZ和12.5 mg/kg右旋糖苷鐵8周：大鼠胸主動脈/腸系膜動脈/大腦基底動脈的血管內皮依賴性舒張功能均有不同程度損傷，損傷程度依次為大腦基底動脈＞腸系膜動脈＞胸主動脈；同樣可見大鼠ROS/ADMA /DDAHⅡ/eNOS通路功能之紊亂。外源性上調DDAHⅡ表達，或外源性補充ADMA生理性拮抗L-Arg、或外源性套用mPTP關閉劑CsA、或外源性套用抗氧化劑牛磺酸或阿魏酸可對抗上述糖/鐵協同造成血管內皮細胞之損傷。 本項目首次發現、證實槲皮素、葛根素等中藥有效成分可顯著上調HUVECs細胞之DDAHⅡ表達，調整ROS/DDAHⅡ/ADMA/eNOS通路，改善線粒體能量供應，維護線粒體功能，進而緩解、對抗上述糖/鐵協同損傷。本研究闡明了亞損傷糖/鐵協同損傷內皮細胞之分子機制，豐富了相關高危人群防治的相關理論基礎，為發現新的藥物作用靶點奠定良好的理論與實驗基礎。 本課題全面完成研究計畫，發表學術論文5篇（標註資助），並培養博士生2名，碩士生4名。
