錦鯉皮膚色素細胞分化和形成相關microRNA篩選和功能研究

《錦鯉皮膚色素細胞分化和形成相關microRNA篩選和功能研究》是依託河南師範大學，由田雪擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：錦鯉皮膚色素細胞分化和形成相關microRNA篩選和功能研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：田雪
• 依託單位：河南師範大學

項目摘要

體色是魚類的重要遺傳性狀之一，多種基因和轉錄因子參與其形成過程。目前，人們對魚類體色形成開展了大量研究，但miRNAs與魚類色素細胞分化和形成的關係，迄今國內外尚無報導。項目以錦鯉為研究對象，從色素細胞分化和形成階段入手，構建魚類色素細胞分化和形成階段的miRNAs表達譜，獲得表達差異miRNAs，篩選與色素分化和形成相關的miRNAs，通過QRT-PCR、雙螢光報告載體、miRNA過表達載體和miRNA antagomir等技術，從細胞和動物水平探討miRNAs在錦鯉色素細胞分化和形成中的功能。本研究將獲得一系列可能在魚類色素細胞分化和形成中發揮調控作用的miRNAs，建立miRNAs在魚類體色形成過程中的調控作用模型，揭示miRNA對魚類色素細胞分化和形成的調控作用，為魚類體色調控機制研究提供一種新的研究思路和理論基礎。

結題摘要

錦鯉體色多樣，但體色性狀極不穩定，具有觀賞價值的錦鯉需要萬中挑一。因錦鯉體色形成的分子機制尚未明確，探索miRNAs在錦鯉色素細胞分化和形成中的作用是對錦鯉體色形成調控機制的有益補充和完善，對錦鯉遺傳品質改良和種質資源開發也具有重要的研究意義。在國家自然基金的資助下，本項目以錦鯉為研究對象，通過觀察錦鯉體色發生的過程，確定了錦鯉色素細胞分化和形成的關鍵時期，並利用高通量測序技術篩選了與色素形成相關的mRNA和miRNAs，利用分子生物學方法從細胞和動物水平對miRNAs參與錦鯉體色形成的機制進行了深入研究，目前各項研究工作均按照契約書順利完成，取得的重要研究進展有以下四個方面：（1）對錦鯉體色發生時期進行觀察，確定了錦鯉體色形成的6個關鍵節點；（2）在錦鯉體色發生4個主要階段的mRNAs和miRNAs表達譜中獲得了59和103個與體色形成相關的基因和miRNAs；（3）從候選miRNAs中挑選了3個miRNAs進行靶基因驗證，確定miR-430-3p和ccr-miR-7132-3p的靶基因為scarb1和tyrp1；（4）合成miR-430-3p agomir注射魚體，確定miR-430-3p可靶向抑制scarb1轉錄，降低scarb1蛋白表達，影響類胡蘿蔔素和蝶呤通路相關基因的表達。綜上所述，本項目證實了miRNAs參與錦鯉色素細胞的分化和形成，研究結果有助於錦鯉體色性狀遺傳基礎的解析，也為錦鯉遺傳品質改良提供一定的理論依據。