《重組HDL-藥物複合物肝靶向性及其分子機制研究》是依託復旦大學，由馮美卿擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：重組HDL-藥物複合物肝靶向性及其分子機制研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：馮美卿
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
高密度脂蛋白（HDL）是血漿中的重要察譽辯脂蛋白，由載脂蛋白、卵磷脂和膽固醇（酯）組成，其生理作用主要是膽固醇逆向轉運至肝臟。載脂蛋白AI（apoAI）是其主要載脂蛋白，約占70%，是HDL功能的主要完成者。肝細胞表面有apoAI特異性受體, 因此apoAI是一潛在的主動肝靶向材料。本課題即利用基因工程表達的章蘭煉凶人源apoAI、卵磷脂、脂溶性藥物（代替膽固醇酯），模擬體內HDL組成及形成過程，製備重組HDL藥物複合物,研究其肝靶向性及分子機制。在細胞和分子水平確證重組HDL藥物複合物肝靶向特異性、在血液輸送過程的變化、對血液成分的影響、細胞內吞、胞內釋藥過程、複合物粒徑對靶向特異性的影響及體內藥效研究，為新型靶向材料的研究提供理論依據和相關方法。
結題摘要
本研究內容以載脂蛋白A-Ⅰ為載體，水溶性抗腫瘤藥鹽酸阿黴素為模型藥，用原位肝癌動物試埋模型，研究了載脂蛋白A-Ⅰ體內外肝靶向性及治療效果，結果表明載脂蛋白A-Ⅰ有較好的肝靶向性，且體外安全性良好。首先製備重組高密度脂蛋白-鹽酸阿黴素複合物(rHDL-DOX)，結果表明，pH法由於可操作性及包封率差而不適用於重組製備；薄膜分散法所得製品平均粒徑為59.70 nm ± 4.50 nm，包封率為20.20% ± 4.17%；硫酸銨梯度法所得製品平均粒徑為113.80 nm ± 10.29 nm，包封率為83.33% ± 8.45%。製備的rHDL-DOX體外表征良好，凍乾品的穩定性好。同時體外溶血性實驗證明rHDL-DOX無溶血性。以佛波酯誘導THP-1細胞形成的巨噬細胞估整精檢驗rHDL-DOX的細胞相容性，結果表明rHDL-DOX不會誘導巨噬細胞產生相關炎症因子，反而下調MMP_2、COX2等炎症介質的表達，上調PPAR-a的表達。ELISA分析細胞上清液與mRNA水坑希盼平檢測結果一致。顯示rHDL-DOX不會刺激巨噬細胞產生炎症因子，引起相關免疫反應，反而可以下調部分炎症因子的表達，作為載體材料有良好的生物相容性 rHDL-DOX體內外肝靶向性。體外肝靶向性通過多種細胞株對rHDL-DOX吸收進行定量比較，結果顯示肝癌細胞對rHDL-DOX有更強的吸收結果，rHDL-DOX對人肝癌細胞有更強的殺傷作用。同時利用螢光標記手段定性考察了apoA-Ⅰ在介導藥物進入細胞的作用，頸抹漿凳結果螢光顯微鏡下觀察到含達愚棵有apoA-Ⅰ的rHDL-Rh6G比OL-Rh6G在細胞內具有更強的螢光強度，進一步證明該結果由於apoA-Ⅰ的介導而產生的。體內肝靶向性通過考察大鼠藥時曲線與組織分布實驗進行比較，實驗結果表明，rHDL-DOX在大鼠體內半衰期長，消除半衰期t1/2β分別是OL- DOX的1.25倍，藥時曲線下面積AUC(0-∞)是OL- DOX的2.58倍。同時與free DOX比較，rHDL-DOX的肝臟相對攝取率Re=1.824，高於其他組織。這些結果均提示rHDL-DOX能夠靶向將DOX帶到肝臟部位進行代謝，具有體內靶向性特點。 本課題進一步研究了rHDL-DOX在用於治療肝癌的實際效果，通過MTT手段比較不同藥物對肝癌細胞的活性，同時建立裸鼠原位肝癌模型，以裸鼠體重和腫瘤大小變化為主要考察指標，評
