《連線蛋白Cx43在多發性骨髓瘤成骨細胞巢重塑中的作用》是依託蘇州大學，由傅晉翔擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：連線蛋白Cx43在多發性骨髓瘤成骨細胞巢重塑中的作用
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：傅晉翔
- 依託單位：蘇州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
多發性骨髓瘤（MM）中具有幹細胞群體定居於成骨細胞（OBs）巢（Niche）,是腫瘤的發生和發展的關鍵,近年倍受關注。Cx43是一種重要的細胞間隙連線蛋白。我們的前期研究發現OBs主要表達Cx43,並支持MM細胞生長，抑制地塞米松誘導的細胞調亡。可能與BOs和MM幹細胞相互作用有關，但確切機制尚需進一步探討。鑒此，本研究以OBs巢為切入點，Cx43為靶分子，採用流式細胞術、實時定量PCR、Elisa及Western blot等方法分析OBs在MM細胞生存及增殖中的作用，尤其是細胞相互作用過程中Cx43表達對MM生存、增殖及細胞因子分泌的影響，在此基礎上，建立Balb/c-nu-hu小鼠MM模型，免疫螢光或組化等方法觀察Cx43對MM細胞體內分布、遷移及增殖的作用，探討MM細胞歸巢骨髓後對OBs細胞巢的重塑，從不同角度探討MM的發病機制，並尋找新的靶分子。
結題摘要
多發性骨髓瘤（MM）以惡性漿細胞在骨髓中克隆性增殖和堆積為特徵，MM細胞通過粘附分子直接或細胞因子自分泌/旁分泌的間接作用促進其生存和增殖，並上調抗凋亡信號。由跨膜通道組成的間隙連線是細胞間相互交流途徑之一，促進細胞間小分子物質的交換，它可使相鄰細胞的胞漿相互流動。現有的研究證實間隙連線產生的信號交流在多種細胞的增殖中發揮作用包括骨細胞。然而，Cx43在MM細胞增殖和生存中的作用仍尚闡明。鑒此，本研究似分析MM細胞是否可通過GJIC與成骨細胞（OBs）相互作用、MM介導的GJIC是否促進MM細胞的生存和增殖，並探討其可能機制。由於OBs為分化成熟細胞，增殖能力弱，不能在體外大量培養，為使體外實驗結果穩定、可靠，我們對比了OBs及其前體細胞（pre-OBs），證實它們之間生長特性也相似，故實驗中均採用pre-OBs。 本研究中我們分析了MM細胞及pre-OBs的Cx43表達及由其形成的間隙連線，在3個MM細胞株（RPMI 8226、U266和XG7）及新鮮分離的MM患者的MM細胞，幹細胞樣MM細胞（SP細胞）及pre-OBs細胞中Cx43的表達情況，結果發現所有檢測的MM細胞株即RPMI 8226、U266和XG7均有Cx43表達，而SP細胞則不表達Cx43分子，而檢測的7例MM患者的新鮮標本中有5例表達Cx43。與正常對照相比從MM患者骨髓中分離的Pre-OBs細胞高表達Cx43分子，染料轉移試驗證實MM與pre-OBs間可通過Cx43分子形成有效的GJIC，染料轉移可被庚醇抑制。三維培養發現共培養後4小時MM細胞即可遷移進入pre-OBs球，並隨時間延長而增多，加入庚醇後受抑。動物在體研究發現阻斷MM細胞與pre-OBs間的GJs，可影響腫瘤植入，無論是小鼠皮下或移植骨腔內接種其腫瘤形成均小於未處理的小鼠，由此證實MM細胞與OBs間的GJIC是功能性能的。本研究還發現對地塞米松或硼替佐米敏感的MM細胞與pre-OBs共培養後，MM細胞對該類藥物的敏感性顯著下降，但加入間隙連線抑制劑—庚醇後可部分恢復其敏感性。值得注意的是聯合使用粒系集落刺激性因子（G-CSF）後，可抑制pre-OBs分泌SDF-1，並顯著上調硼替佐米的作用。本研究證實MM與pre-OBs形成的GJIC在MM生存及藥物敏感中發揮關鍵作用，並可能與MM的復發有關。
