《豬-猴胰島移植的供體改造和耐受誘導研究》是依託四川大學，由程驚秋擔任項目負責人的重點項目。
基本介紹
- 中文名：豬-猴胰島移植的供體改造和耐受誘導研究
- 項目類別：重點項目
- 項目負責人：程驚秋
- 依託單位：四川大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
靈長類動物模型、供體基因改造、移植耐受誘導是異種移植研究的公認重要問題。課題組通過家豬-恆河猴異種胰島移植，以延長胰島移植物功能性存活時間為主攻方向，將這三個問題相結合進行探索：1、建立最為接近人類的恆河猴I型糖尿病實驗模型，以該模型為主要實驗工具開展體內研究，獲得的結果更能夠反映豬-人異種移植的真實情況；2、利用家豬胰島體外製備的時機實施供體遺傳改造，選擇異種移植公認重要基因DAF和A20對胰島細胞實現聯合基因轉導，觀察移植物有功能存活時間，可能在減輕移植物體液排斥反應和炎性損傷方面獲得突破；3、利用調節性T細胞具有的免疫抑制調節活性，分離擴增受體恆河猴CD4+CD25+Foxp3+Tregs，並與家豬胰島聯合輸注移植，觀察比較移植物存活時間、受體的免疫指標和病理生理指標變化，探索Tregs誘導胰島移植免疫耐受的可能性和作用機制，若獲成功可能在誘導異種移植耐受方面獲得突破。
結題摘要
本項目按計畫執行，取得以下重要研究成果：1、首次建立猴T1DM模型：以連續多次小劑量靜脈注射STZ的方法成功誘導了自身免疫性恆河猴糖尿病模型；通過比較，證明了豬胰島素的安全有效、經濟實用性。2、新生豬胰島（NPI）分化發育和基因改造研究：發現骨髓間充質幹細胞（MSCs）可合成PDGF，進而活化NPI的PDGF-α受體，促進NPI的發育和功能。比較了不同病毒載體，發現腺病毒在較低感染複數條件下可達到對NPI較高感染效率。將CTLA-4Ig轉和非轉基因NPI移植入糖尿病猴肝內，給予免疫抑制劑，比較移植效果，結果CTLA-4Ig轉基因能夠提高異種胰島移植的成功率，促進胰島的長期存活。3、MSCs誘導豬-猴胰島移植免疫耐受研究：結果表明猴MSCs能夠改善缺氧引起的NPI代謝活性和功能降低，誘導抗缺氧基因表達，抑制淋巴細胞活化與增殖，有效保護高糖或炎症因子對胰島細胞造成的應激損傷，維持胰島的活性及功能。將猴MSCs與NPI聯合移植入糖尿病猴肝內，能夠明顯增加受者血清C-肽含量，促進胰島的發育成熟，提高胰島移植的成功率。4、胰島骨髓腔移植：比較恆河猴同種異體胰島的骨髓腔和肝內移植治療糖尿病的效果。結果提示骨髓腔移植手術操作簡單，胰島存活並保持功能時間更長，骨髓腔可能成為未來臨床胰島移植的適合位點。5、恆河猴凝血功能相關研究：發現在血糖控制不佳時血小板特異性的受體GP-VI參與的ROS產生和Ca2+流動明顯增強，與糖尿病的高凝血狀態相關。克隆得到猴血小板受體GP-Ib-α、GP-Ib-β、GP-IX基因編碼序列，分析發現其與人的核酸和蛋白序列高度相似，但在相同濃度的瑞斯托菌素作用下猴血小板聚集能力明顯較人低。6、CD83和CTLA4基因研究：在畢赤酵母中高效表達了融合蛋白hsCD83-Ig和mCTLA4-Ig，證明其能抑制淋巴細胞活化，有可能用於異種胰島移植的免疫治療。7、 恆河猴TNF-α蛋白研究：採用SUMO標籤融合表達體系，合成TNF-α融合基因轉入大腸桿菌表達，得到的天然樣恆河猴TNF-α為三聚體蛋白，對TNF-α拮抗劑研發和評價具有重要的價值。8、恆河猴Tregs研究：天然Tregs在體外用抗CD3/CD28磁珠刺激後能有效擴增， TGF-β聯合ATRA能誘導CD4+CD25-T細胞轉化為CD4+CD25+誘導性Tregs，誘導第5天時，Tregs的純度最高抑制活性最強
