《誘導耐藥雞毒支原體的比較蛋白質組學研究》是依託中國農業大學，由夏曦擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：誘導耐藥雞毒支原體的比較蛋白質組學研究
- 依託單位：中國農業大學
- 項目負責人：夏曦
- 項目類別：青年科學基金項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
動物源病原菌耐藥性已經成為國內外關注的熱點。雞毒支原體是一種危害嚴重的病原體，給養禽業造成極大的經濟損失。大環內酯類抗生素是獸醫臨床防治雞毒支原體感染的首選藥物，但雞毒支原體對該類藥物的耐藥性日益嚴重，而耐藥機制尚不完全清楚。已有的報導主要運用分子生物學技術研究耐藥相關性的基因，尚未有從蛋白質水平進行雞毒支原體耐藥性的研究。本項目擬運用高通量的蛋白質組學技術，以雞毒支原體的敏感株和大環內酯類誘導耐藥株為研究對象，構建雞毒支原體耐藥株和敏感株的蛋白表達差異譜，以及耐藥株在藥物作用壓力下的蛋白表達差異譜，為深入研究耐藥株的差異蛋白的結構和功能及其介導的耐藥性機理奠定基礎。
結題摘要
本研究成功獲得畜禽專用大環內酯類藥物泰樂菌素的體外誘導雞毒支原體耐藥株，利用其作為耐藥模型建立和最佳化分析雞毒支原體蛋白質組的二維凝膠電泳方法，並進一步利用二維螢光差異凝膠電泳（2D-DIGE）進行分離和分析雞毒支原體敏感株與泰樂菌素耐藥株蛋白質組的差異。差異蛋白點經酶切後用超高效液相色譜-飛行時間質譜進行分析，成功鑑定出13個差異蛋白，其中8個上調，5個下調。選取熱休克蛋白（DnaK-HSP70）和ATP合成酶β亞基（ATPB），運用蛋白免疫印跡技術（Western blot）進行定量分析，對2D-DIGE的分析結果進行驗證。另外，對於不同濃度藥物壓力下的耐藥菌株，運用多反應監測質譜（MRM-MS）定量技術對無機焦磷酸酶（Inorganic pyrophosphatase）和磷酸甘油酸激酶（Phosphoglycerate kinase）這兩個下調蛋白的表達量進行了驗證。對差異表達蛋白質的生物學功能和蛋白相互關係的分析表明，延伸因子G、延伸因子Tu、ATP合成酶β亞基、熱休克蛋白、GrpE蛋白、無機焦磷酸酶、磷酸甘油酸激酶、bifunctional protein FolD等8個蛋白與耐藥性密切相關，推斷雞毒支原體對泰樂菌素的耐藥機制有以下3個方面：（1）催化甲醯四氫葉酸的形成，以促進起始tRNA的甲醯化；（2）改變能量代謝方式，提供能量儲備；（3）延伸因子過量表達，促進tRNA與核糖體的結合，以及核糖體構像的改變，以抵消泰樂菌素的阻斷作用。本項目首次從蛋白質層面對雞毒支原體的耐藥機制進行了研究，為深入全面闡明其耐藥機理開闢了新的方向。
