《蛋白激酶中非磷酸化修飾形式鑑定的系統研究》是依託南開大學，由張鍇擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：蛋白激酶中非磷酸化修飾形式鑑定的系統研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：張鍇
- 依託單位：南開大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
蛋白激酶是介導蛋白質發生磷酸化修飾的生物催化酶，調節信號轉導等重要生物功能。臨床醫學表明，超過50%的腫瘤與蛋白激酶的異常表達相關，激酶是當前抗腫瘤藥物的熱門靶點。以往的研究認為激酶的功能僅與其磷酸化修飾有關，隨著激酶研究的深入，人們發現一些激酶中存在磷酸化修飾以外的其它類型修飾，並與腫瘤有密切聯繫。然而，通常這些非磷酸化修飾在激酶中鑑定困難，目前尚沒有系統有效的分析方法。本課題以激酶中低豐度非磷酸化修飾為目標，聯合標籤激酶蛋白融合過表達與親和富集技術、LC/MS/MS分析以及新的蛋白修飾專門軟體PTMap，建立激酶非磷酸化修飾鑑定的新方法，系統分析80種主要酵母激酶的各種非磷酸化修飾狀態，在激酶蛋白家族中搜尋新的、未知的蛋白修飾形式。最後研究檢測食管癌細胞內激酶修飾變化的定量方法。本課題是對激酶修飾分析方法的發展和補充，有利於新的、未知的蛋白修飾的發現，促進激酶生物功能的研究。
結題摘要
本項目以激酶家族蛋白中低豐度、非磷酸化修飾為目標，聯合標籤激酶蛋白融合過表達與親和富集技術、基於質譜技術的蛋白質組學方法，以及新的蛋白修飾信息學分析工具，建立了蛋白激酶非磷酸化修飾的鑑定新方法。與以往的分析策略相比，該方法能夠更全面地分析激酶上各種修飾形式。我們採用這一集成方法分析了酵母細胞中80種激酶的各類蛋白修飾形式，初步研究了酵母激酶家族蛋白的非磷酸化修飾圖譜。我們的研究表明：激酶中可能存在很多未見報導、磷酸化以外的蛋白修飾形式，一些修飾的結構尚不清楚。通過對色氨酸和半胱氨酸等殘基上發現的各種修飾形式的解析和分析，我們探討了其中一些未知修飾的結構和可能的發生機理。我們專門對激酶蛋白中鑑定到的8種羥基化修飾進行了研究，大部分羥基化修飾位點都未見文獻報導，我們初步探索了這些羥基化修飾的酶促反應機理和發生規律。我們嘗試將發展的蛋白組學分析方法套用於食管癌標誌物的研究。我們研究了與腫瘤侵襲密切相關的骨架結合蛋白Ezrine、及其修飾和蛋白複合物的分離鑑定新方法，並嘗試套用於不同侵襲性食管癌細胞的表征；探索了組蛋白表觀遺傳修飾的分離、富集和鑑定新方法，並嘗試套用於食管癌侵襲與組蛋白表觀遺傳修飾關聯性的研究；採用集成的定量蛋白質組學技術和生物信息學方法，探索了抗腫瘤藥物在食管癌中靶點作用蛋白的鑑定，以及對靶向蛋白網路的調控。本項目按照研究計畫執行，完成既定目標。項目的部分研究成果已經發表SCI論文8篇，核心論文1篇，另有2篇論文已被SCI雜誌錄用。
