《藻毒素降解關鍵酶的高通量篩選及降解機理研究》是依託復旦大學，由劉思秀擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：藻毒素降解關鍵酶的高通量篩選及降解機理研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：劉思秀
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
頻繁發生的藍藻水華向環境中釋放的藻毒素(MCs)是一種強烈的肝毒素和腫瘤促進劑，微生物降解在MCs的歸趨中起重要作用。但不同菌種的降解的機理尚未闡明，高效降解關鍵酶基因信息資源缺乏。本項目以多株分離純化出的新的MCs降解純菌種為研究對象，套用高通量晶片篩選技術結合基因組文庫等分子生物學技術，在以矽酮為載體的晶片上，通過驅動已構建的MCs降解菌基因表達文庫各片段細胞溶液和MCs在微米孔徑的微管中流動，保持蛋白活性，實現兩者反應，反應器出口連線光纖分光光度計和MS檢測儀，對MCs濃度及反應各級中間產物進行跟蹤檢測，分析、篩選涉及MCs降解過程的所有關鍵酶類，並對降解中間產物及降解機理進行深入研究。該生物晶片能夠套用於研究多種微生物菌種降解不同藻類毒素的機理和對多種降解關鍵酶類進行高通量篩選，效率高、費用低、污染少、易重複，解決了生物晶片蛋白固定失活問題，避免了複雜的常規實驗重複和浪費。
結題摘要
頻繁發生的藍藻水華向環境中釋放的藻毒素(MCs)是一種強烈的肝毒素和腫瘤促進劑，微生物降解在MCs 的歸趨中起重要作用。但不同菌種的降解的機理尚未闡明，高效降解關鍵酶基因信息資源缺乏。本項目以高效藻毒素降解土著菌SHFDT5為研究對象，成功建立了SHFDT5的基因組表達文庫，設計製備了可以篩選具有降解MC功能文庫片段的微流控晶片，該晶片的混合反應腔室能夠在適宜離子強度和pH值的緩衝體系中維持蛋白酶活性，出口外接光纖紫外分光光度計對反應後的MC濃度進行跟蹤檢測；免疫檢測模組能夠對微量的MC濃度變化進行確認。經驗證本研究共篩選出 63個文庫陽性克隆並選取片段進行測序。該篩選檢測晶片能夠套用於研究多種微生物菌種降解不同藻類毒素的機理和對多種降解關鍵酶類進行篩選，效率高、費用低、污染少、易重複，解決了生物晶片蛋白固定失活問題，避免了複雜的常規實驗重複和浪費。
