《藥物代謝酶絕對豐度快速測定方法的建立》是依託中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院，由孫愛華擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：藥物代謝酶絕對豐度快速測定方法的建立
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：孫愛華
- 依託單位：中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
臨床聯合用藥發生的不良反應屢有報導，以細胞色素P450 酶(P450)為主的肝.髒藥物代謝酶在其中發揮重要作用，藥物代謝酶譜的尋找和相關調控是藥理/毒理學領域的.一個研究熱點和難點。藥物代謝酶譜絕對濃度的快速測定是指基於多反應監測（Multi Reaction Monitor，MRM）與同位素標記肽段的靶向蛋白質組學技術，同時對多種肝臟藥物代謝酶進行絕對濃度測定，建立其快速檢測的平台。與傳統的藥代酶酶活測定、mRNA豐度測定及蛋白質豐度變化趨勢測定（western blot）方法相比，該方法具有通量高、特異性強和準確度高的特點。在此基礎上，我們將對健康成人肝臟中全部藥物代謝酶的絕對濃度進行測定，不僅為用藥前後藥代酶在肝臟表達變化的測定提供參考數據，也為以藥代酶為基礎的藥物相互作用機制研究奠定基礎。
結題摘要
肝藥酶濃度測定對於研究藥物代謝、用藥安全及藥物間的相互作用具有十分重要的意義。因此，我們運用QconCAT結合MRM方法對人肝微粒體中的肝藥酶進行高通量的精確定量。目前，藥物對藥代酶的檢測方法仍多限於酶活性測定、mRNA豐度測定或者簡單的蛋白質豐度變化趨勢測定（免疫組化、western等），並非所有的藥物代謝酶都有成熟的活性檢測方法及相應的商業化抗體；mRNA豐度及蛋白質豐度又不完全一致。作為上述檢測方法的補充，本研究旨在基於QconCAT/MRM技術建立26個肝藥酶快速、高通量的檢測方法。本研究為26個人肝臟表達的藥物代謝酶提供可用於定量的肽段56條，每條肽段提供3對離子對信息。方法學評估結果表明各肽段在2-500 fmol豐度範圍內的標準曲線回歸係數r值均大於0.99。用3個不同濃度（8-80 fmol）的質控樣本(quality control，QC)評估結果顯示，定量精確度（1-RE）在91.5-98.67%， 準確度（1-RSD）在96.9%以內。用建立的方法分別測定50例混合及10例單例人肝微粒體中肝藥酶的絕對豐度，豐度範圍分別在2.83-161.66 、3.08-194.82 pmol/mg微粒體蛋白。兩組樣本中肝藥酶的豐度變化趨勢比較一致（r2=0.84），表明不同肝藥酶在人群個體中的表達趨勢比較一致。人肝臟中UGTs表達豐度明顯高於CYP450s蛋白。豐度排前5位的是CYP2C9, UGT2B7, UGT1A4, UGT1A6 和UGT2B4，豐度分別是194.82, 184.73, 87.22, 71.40 and 58.47 pmol/mg 微粒體蛋白。本研究中，8個肝藥酶UGT2B4, CYP27A1, CYP4F3, CYP4F2, CYP2J2, CYP4F12 UGT1A4 和CYP51A1首次在人群中給出絕對豐度信息。為了評估該方法與傳統western方法測定豐度趨勢的一致性，本研究以CYP3A4為例，比較該蛋白質在10例人肝微粒體樣本中分別用兩種方法測定的豐度變化的趨勢，二者的一致率達0.87（r2=0.76）。總之，本研究建立了可信度較高的肝藥酶絕對豐度快速、規模化測定方法，為26個肝藥酶提供了在質譜水平可用於豐度測定的肽段和離子對。給出了其在小樣本人群中的豐度參考值，為後續的藥物代謝、藥物相互作用及用藥個體化研究提供技術支持。
