《葡萄卷葉病毒外殼蛋白基因的克隆基因葡萄的培育》是依託北京林業大學，由田硯亭擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：葡萄卷葉病毒外殼蛋白基因的克隆基因葡萄的培育
- 依託單位：北京林業大學
- 項目負責人：田硯亭
- 項目類別：面上項目
- 負責人職稱：教授
- 批准號：39770632
- 研究期限：1998-01-01 至 2000-12-31
- 申請代碼：C1611
- 支持經費：11（萬元）
項目摘要
參照國外報導設計併合成了一對引物，從我國感染GLRaV的葡萄韌皮部中提取到約18kb的GLRaBV-dsRNA，以此為模板，採用RT-PCR擴增約1kb的cDNA片段。PCR產物被克隆到pBluescript ⅡSK中間載體，轉化大腸桿菌E.coliJM109菌株，經酶切分析，得到了正向插入的重組質粒。測序發現，GLRaV-CP基因與美國報導的GLRaV-3CP基因核苷酸序列同源性達99.15%，推測胺基酸序列同源性98.09%。通過大腸桿菌表達載體pBV221，構建了GLRaV-CP基因的大腸桿菌蛋白表達克隆，發現一條約35KDa的特異表達蛋白帶，與GLRaV-3外殼蛋白大小一致。通過載體pBin438，構建了GLRaV-CP基因的植物表達載體，實現了以農桿菌介導的葡萄遺傳變化，獲得了抗卡那黴素和PCR檢測陽性結果的轉基因葡萄再生植株。
