苦參鹼逆轉ABCG2介導白血病細胞多藥耐藥的機制研究

《苦參鹼逆轉ABCG2介導白血病細胞多藥耐藥的機制研究》是依託武漢大學，由楊芳擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：苦參鹼逆轉ABCG2介導白血病細胞多藥耐藥的機制研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：楊芳
• 依託單位：武漢大學

項目摘要

白血病是一類造血幹細胞的惡性克隆性疾病，反覆化療導致多藥耐藥性（MDR）的產生是其治療失敗的主要原因，ABCG2是MDR過程的關鍵蛋白。資料表明苦參鹼具有拮抗MDR的作用，它是否是通過干擾ABCG2的空間構象，從而發揮效應？本研究針對該問題，檢測苦參鹼處理前後，白血病細胞內化療藥物聚集濃度變化及ABCG2表達量變化，明確苦參鹼對MDR的抑制作用；原核表達ABCG2蛋白並純化後，採用多種結構生物學技術，獲得苦參鹼與ABCG2互作相關參數，明確逆轉MDR的分子機制；利用電噴霧離子化飛行時間質譜法檢測ABCG2溶液中二聚體含量及ATP酶活性變化；利用RNAi技術沉默細胞ABCG2基因後，外源導入ABCG2的真核表達載體，檢測苦參鹼對不同ABCG2表達水平的細胞藥物外排泵功能的影響及ABCG2表達量改變。本項目將深化對苦參鹼逆轉MDR機制的理解，為篩選白血病MDR中藥抑制劑提供分子生物學相關信息。

結題摘要

白血病是一類造血幹細胞的惡性克隆性疾病，反覆化療導致多藥耐藥性（MDR）的產生是其治療失敗的主要原因，ABCG2 是MDR 過程的關鍵蛋白。資料表明苦參鹼具有拮抗MDR 的作用，它是否是通過干擾ABCG2 的空間構象，從而發揮效應？本研究針對該問題，首先檢測多種細胞系中ABCG2的mRNA表達水平，並且檢測苦參鹼處理前後，白血病細胞內化療藥物聚集濃度變化及ABCG2 表達量變化，明確苦參鹼對MDR 的抑制作用；利用螢光淬滅法、圓二色光譜法及等溫滴定量熱法，研究苦參鹼與ABCG2純化蛋白互作對ABCG2結構的影響；利用流式細胞術及雷射共聚焦技術，研究苦參鹼與ABCG2互作對ABCG2功能的影響，明確逆轉MDR 的分子機制；利用RNAi技術沉默細胞ABCG2 基因後，外源導入ABCG2 的真核表達載體，檢測苦參鹼對不同ABCG2 表達水平的細胞藥物外排泵功能的影響及ABCG2 表達量改變。本項目將深入研究ABCG2在白血病多藥耐藥中所發揮的功能，並深化對苦參鹼逆轉MDR機制的理解，為篩選白血病MDR中藥抑制劑提供分子生物學相關信息。