苜蓿黃萎病菌

黃萎輪枝孢的寄主植物很廣泛，但侵染苜蓿的菌系寄主較少，且各地菌株的致病性不一致。北美分離菌株主要為害苜蓿，也侵染馬鈴薯、蠶豆、草莓、冠狀岩黃芪和紅花菜豆等

基本介紹

• 中文名：苜蓿黃萎病菌
• 外文名： Clover　Verticillium wilt
• 亞門： ：半知菌亞門
• 記錄號：： IO00029

基本信息

編號： 29

中文名： 苜蓿黃萎病菌

拉丁學名： Verticillium albo-atrum Reinke & Rerthold

門： 真菌門

綱： 絲孢綱

目： 叢梗孢目

科： 叢梗孢科

屬： 輪枝孢屬

原產地： 瑞典

入侵地： 尚未發現，但存在嚴重隱患

國外分布

主要分布於歐洲和北美北緯40。以北各國。包括德國、法國、英國、義大利、丹麥、瑞典、波蘭、匈牙利、前捷克斯洛伐克、前蘇聯、加拿大、美國、紐西蘭、墨西哥和日本。

寄主範圍

黃萎輪枝孢的寄主植物很廣泛，但侵染苜蓿的菌系寄主較少，且各地菌株的致病性不一致。北美分離菌株主要為害苜蓿，也侵染馬鈴薯、蠶豆、草莓、冠狀岩黃芪和紅花菜豆等，並表現症狀。羽扇豆、豌豆、紅三葉、白三葉、草木犀、驢喜豆、大豆、羅馬甜瓜、茄子、忽布、西瓜等帶菌，但不表現症狀。另有報導，大豆、花生和茄子等用苜蓿分離菌接種後表現嚴重症狀。據楊家榮等(1997)接種測定，苜蓿黃萎病菌英國菌系對豌豆、番茄、茄子、西瓜、綠豆、豇豆和馬鈴薯具致病力，而對棉花、線椒、甜椒、向日葵、大豆無致病力。亦有報導稱可侵染棉花，但需進一步鑑定明確。本菌引起系統性病害，全株發病。

危害特點

苜蓿被侵染後表現黃化、矮縮、萎凋等症狀，第二年產草量降低15%～50%，第二年後期至第三年初期病株陸續衰弱死亡，縮短了產草期。導致嚴重的苜蓿產量損失，大大縮短了苜蓿草地的使用壽命，影響苜蓿乾草及種子出口。

典型症狀

發病早期病株上部葉片在溫度較高時表現暫時性萎蔫，繼而中、下部葉片失綠變黃，嚴重時變枯白色，整株萎凋，橫切病株莖部可見維管束變褐。發病後期植株因生育停滯而嚴重矮化。該病重要診斷特徵還有：(1)小葉頂端出現V字形黃變壞死斑塊，嚴重時病葉捲縮扭曲；(2)病株葉片枯萎，但莖部在較長時間內仍保持綠色；(3)在潮濕條件下，枯死莖表面敷生灰色霉狀物，即病菌的分生孢子梗。

病原形態

在PDA培養基上菌落白色至灰色，絨毛狀，後因生成暗色休眠菌絲，菌落中央變黑褐色。分生孢子梗直立，有隔，無色至淡色，但在植物基質上生長的老熟孢梗基部膨大，暗色。梗上每節輪生2～4個小梗(輪枝)，可有1～3輪，小梗尺度20～30(～50)μm×1.4～3.2μm，頂端亦生小梗(頂枝)。小梗端部的產孢瓶體連續產生分生孢子，聚集成易散的頭狀孢子球。有時小梗發生二次分枝。由苜蓿莖長出的分生孢子梗長55～163μm，寬3.8～5.6μm。梗的頂枝長30～49μm，寬2．2～4.4μm，輪枝長22～27μm，枝層間距29～46μm。分生孢子無色，單胞，橢圓形、圓筒形，大小3.5～10.5(12.5)μm×2～4μm。休眠菌絲暗褐色至黑褐色，直徑3～7μm，分隔規則，隔膜間膨大，成念珠狀，有時集結成菌絲結或瘤狀菌絲體。

黃萎輪枝孢在瓊脂培養基平板上菌落生長適溫為20～22.5℃，在30℃不能生長。苜蓿菌系對溫度的要求有所不同，其生長適溫高達25～26℃，在15℃和27℃時生長較差，在5℃和33℃時停止生長。在PLYA平板上培養，溫度20～27℃，20d後形成暗色菌絲體。培養溫度為10℃或15℃時，延遲數周后方能形成。黃萎病菌產生的毒素為蛋白質一脂多糖複合物，其中蛋白組分具有致萎作用。苜蓿黃萎病菌毒素粗提液經長期貯存和在100℃以上高溫下處理後仍有致萎活性。

苜蓿黃萎病菌

發病條件

黃萎病菌的休眠體隨病殘體在土壤中越冬，翌年環境適宜時，產生菌絲由幼苗根部侵入寄主造成系統發病。病原菌可由健株刈割後莖部的傷口侵入。田間早期病株和死株莖稈上產生的氣傳分生孢子，可引起當季再侵染，但再侵染的作用很小。

苜蓿黃萎病的發生和消長變化，與品種抗病性、病菌致病性和環境因素有密切關係。土壤中已積累了相當數量的病原菌接種體，並連續種植感病品種後，若遇適宜環境條件，黃萎病就會嚴重發生。苜蓿黃萎病在灌區，或降水頻繁，土壤濕度較高的地區發生較重。在黏土、壤土和富含有機質的土壤中發生較重，對土壤酸鹼度沒有明顯的選擇性，該病發生的溫度範圍較廣，病菌生長適溫較高，在較高溫度下發病嚴重度仍較高。因而適生地區較廣。

傳播途徑

苜蓿黃萎病菌傳播途徑很多，帶菌種子和帶菌植物材料、昆蟲等是病菌傳人新區的主要載體。種子是黃萎病菌遠程傳播的重要載體，種子外部和內部都能帶菌，混雜在種子間的病殘體也帶菌傳病。豌豆蚜(Acyrthosiphon pisum)、苜蓿象(Hyperapostica)、蝗蟲和蕈蚊(Bradysia spp．)都是黃萎菌傳播介體。加拿大苜蓿切葉蜂(Megachile rotundata)用苜蓿葉片築巢也帶菌，切葉蜂巢常由加拿大輸往歐美，因而也可能是黃萎病遠距離傳病的途徑。病區的帶菌苜蓿草製品也是黃萎病遠距離傳播的主要途徑。以曬制的乾草作原料，生產苜蓿粉時，黃萎病菌經過脫水過程後仍可存活。

此外，在苜蓿田作業的農業機械、卡車、混雜有其他寄主殘屑的種子、牲畜食用病草後的糞便等也都可能傳播苜蓿黃萎病。

檢測方法

1．田間診斷用常規組織分離法由病株分離病原菌，即由病部切取小塊組織，表面消毒後，置床於PDA或MA培養基平板上。在20～25℃下培養2～3周。在菌落中央產生暗色休眠菌絲體的為黃萎輪枝孢，近似種大麗輪枝孢則生成黑色微菌核。

分離和鑑定輪枝孢屬真菌還常採用PLYA培養基(梅乾煎汁培養基)，該培養基配方為：梅乾煎汁100ml，乳糖5g，酵母浸膏1g，瓊脂30g，蒸餾水900ml。製取梅乾煎汁需將50g梅乾切成小片，在100ml水中煮沸30rain,梅乾渣滓榨出汁液後棄去，煎汁調節pH至5.8～6.0備用。黃萎輪枝孢用該培養基在25℃下培養15d左右，可由培養皿背面清晰觀察到暗色休眠菌絲形成的輻射狀結構，而大麗輪枝菌則生成多數微菌核，呈小瘤狀或顆粒狀。

鑑定大量標本時最好採用濕皿培養法，該法簡單，可避免使用上述瓊脂培養基常遇到的雜菌污染問題。該法是在直徑9cm的玻璃培養皿底部鋪2～3層吸水紙(濾紙)作成培養床，高壓滅菌備用。使用前每皿滴加30ml滅菌水，浸濕吸水紙。取新鮮病株莖或葉柄切成1cm長的小段，用自來水沖洗掉表面的泥土雜物後，用含2%～3%有效氯的次氯酸鈉液表面消毒1～2min，無菌水沖洗3次後，用滅菌解剖刀橫切成厚度1～4mm的小片，並放置在濕皿內濾紙上，每皿5～10片，濕皿封閉在塑膠袋中培養。黃萎病菌的菌絲可由病組織蔓延到吸水紙上並形成分生孢子梗、分生孢子和休眠結構。用實體顯微鏡觀察，可清晰地看到分生孢子梗的暗色基部。另外，在吸水紙與皿底玻璃之間可形成輪枝孢的休眠結構。

2．種子帶菌檢驗檢驗種子表面帶菌可將種子樣品放入滅菌水內，震盪洗滌15min後，取定量洗滌液，滴在培養皿內Czapek瓊脂培養基平板表面，並充分展布，在22℃下培養7d後選取菌落，挑取分生孢子，在PDA或PLYA培養基平板上劃線。菌落長成後根據病菌形態鑑定。為防止細菌污染，所用培養基中均可加入抗菌素(100mg/kg硫酸鏈黴素，50mg/k四環素)。

檢驗種子內部帶菌，需先用含有效氯2%的次氯酸鈉液或其他表面消毒劑，進行種子表面消毒，然後用無菌水充分洗滌，植床於上述PLYA培養基平板上或Christen選擇性培養基平板上，在22℃下培養14d後根據病菌形態鑑定。檢查種子中混雜的植株根、莖、葉柄等殘體，洗淨泥土後也可用檢查種子內部帶菌的方法檢驗。

Christen選擇性培養基配方如下：在100ml蒸餾水中加入L-山梨糖2g，L-天門冬素2g，K2HP4Olg，KCl0.5g，MgS4O.7H2O0.5g，Fe-Na-EDTA 0.01g，75%五氯硝基苯1g(有效成分)，牛膽汁0.5g，NaB407.10H20lg，鏈黴素0.3g，高壓滅菌後pH調至5.7。

檢疫防治

禁止調運和種植疫區或疫情發生區生產的種子，禁止運銷疫區或疫情發生區的苜蓿飼草和草製品。由發病國家和地區引進苜蓿切葉蜂(巢)時，也應檢疫。

苜蓿黃萎病的防治應以選育、使用抗病品種為主，採用綜合措施，無病區應嚴格檢疫，嚴防傳人。種子帶菌常是許多新建草地發病的初侵染來源，因而建立無病種子田，是重點防治措施。農業防病措施能減輕病害的發生，與非寄主植物輪作，病田休閒，推行豆科牧草與禾本科牧草混播、問作，適時早刈，實施田間和農業機具清潔措施等，都可以減輕或推遲黃萎病的發生。