《膽鹽水解酶提高乳酸菌腸道存活力的作用機制研究》是依託南京師範大學，由楊瑤擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：膽鹽水解酶提高乳酸菌腸道存活力的作用機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：楊瑤
- 依託單位：南京師範大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
提高乳酸菌腸道存活力是乳酸菌研究及套用中迫切需要解決的問題。本項目將bsh基因克隆重組至乳酸菌中進行研究，前期預實驗初步證明BSH具有提高乳酸菌腸道存活力的作用。進一步研究顯示BSH重組菌的膽鹽耐受力沒有提高，但是與Caco-2細胞黏附性明顯增強，推測後者是上述作用的重要機制，這是一個新的發現。在此基礎上本項目將以BSH重組乳酸菌為對象進行深入研究：通過動物實驗研究其在小鼠腸道記憶體活情況；通過Caco-2細胞模型研究其黏附特性；通過比較蛋白質組學研究其細胞壁蛋白表達差異性。本項目的順利進行將探明與BSH表達相關的乳酸菌黏附素及其變化規律，揭示BSH增強乳酸菌與腸道細胞黏附性的分子機理，為系統闡述BSH提高乳酸菌腸道存活力的作用機制奠定基礎，也為生產上乳酸菌的開發利用提供理論依據。
結題摘要
提高乳酸菌腸道存活力是乳酸菌研究及套用中迫切需要解決的問題。本項目將小鼠腸道來源的bsh基因克隆重組至乳酸菌中進行研究，動物實驗結果顯示BSH重組菌在腸道存活時間高於空載對照組，說明了BSH具有提高乳酸菌腸道存活力的作用。進一步研究顯示BSH重組菌與Caco-2細胞黏附性明顯增強，推測後者是上述作用的重要機制。隨後利用iTRAQ蛋白質組測序方法研究了BSH重組乳酸菌由BSH表達影響的差異蛋白表達情況，本項目採用iTRAQ蛋白質組測序研究BSH重組乳酸菌蛋白表達情況，共鑑定到 1712 個蛋白，定量結果中發現的存在顯著差異的蛋白數為 214（B_L:400_L）和251（B_H:400_H）。其中，BSH表達差異蛋白在 “Metabolic pathways”、“Microbial metabolism in diverse environments”、 “ABC transporters”、 “Ribosome” 和“Two-component system”等功能蛋白方面存在差異。其中， “Metabolic pathways” 功能蛋白的差異最大，上調和下調的蛋白分別占61.9% 和 77.14% 。更重要的是，對差異蛋白結果分析發現由BSH表達影響的23個蛋白差異顯著，其中多個粘附蛋白上調。本項目按照計畫進行，進展順利，研究結果有效揭示了BSH增強乳酸菌與腸道細胞黏附性的分子機理，為系統闡述BSH提高乳酸菌腸道存活力的作用機制奠定基礎，也為生產上乳酸菌的開發利用提供理論依據。
