腸道病毒71型DNA疫苗製備及其免疫效果的最佳化

《腸道病毒71型DNA疫苗製備及其免疫效果的最佳化》是依託同濟大學，由方小楠擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：腸道病毒71型DNA疫苗製備及其免疫效果的最佳化
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：方小楠
• 依託單位：同濟大學

中文摘要

腸道病毒71型(enterovirus 71，EV71)引起兒童手足口病和多種與神經系統相關的疾病，感染後死亡速度快，病死率高，尤其近年來EV71病毒的流行在亞太地區尤其我國呈上升趨勢，但是目前缺乏高效的疫苗預防EV71感染。我們已分離鑑定了本地流行EV71，並構建了含有EV71主要衣殼蛋白VP1、VP2、VP3基因的重組質粒。本課題將在已有研究工作的基礎上利用基因工程的方法構建EV71 VP1、VP2、VP3基因 DNA疫苗，用不同基因的DNA疫苗免疫小鼠，比較各基因所引起的免疫應答情況的差異，選擇免疫效果最佳的基因EV71 DNA疫苗的候選基因；並從免疫佐劑、黏膜免疫、免疫途徑三個方面，對EV71 DNA疫苗的免疫效果進行最佳化，尤其以減毒沙門氏菌為載體進行黏膜免疫，能模擬腸道病原體的感染途徑。本研究將為EV71疫苗的研製和免疫學機制的探討提供理論依據。

結題摘要

腸道病毒71型是小RNA病毒科腸道病毒屬成員，EV71主要感染兒童，引起手足口病，以手、足、口腔等部位發生丘皰疹為主要特徵，此外感染嚴重者還能引起無菌性腦炎、急性遲緩性癱瘓和肺水腫等多種與神經系統相關疾病。自1974年首次報導以來，EV71已在世界範圍內引起十多次爆發與流行。近年來，EV71病毒的流行在亞太地區呈上升趨勢。目前還沒有有效的抗病毒藥物和疫苗可以使用。因此，急需開發一種有效的疫苗預防EV71感染。本課題利用基因工程的方法將EV71的衣殼蛋白VP1、VP2分別克隆到真核表達載體中，構建EV71 DNA疫苗pcDNA- VP1和pcDNA-VP2。以小鼠為動物模型，通過肌肉注射重組質粒進行免疫接種，分別用間接ELISA檢測抗EV71抗體，MTT法測定小鼠體內的淋巴細胞轉化功能，細胞因子釋放試驗檢測其分泌的IFN-γ和IL-4水平，FCM檢測T淋巴細胞亞型，探討核酸疫苗的免疫效果。為最佳化EV71 VP1 DNA疫苗的免疫效果，構建鼠IL12、GM-CSF重組真核表達質粒pcDNA- IL12和pcDNA-GM-CSF，之後通過肌肉接種和pcDNA- VP1共同免疫小鼠，檢測IL-12和GM-CSF作為基因佐劑對EV71 VP1 DNA疫苗的免疫調節作用；構建EV71 VP1原核表達載體，轉化大腸桿菌表達純化，採用EV71 VP1 DNA初始免疫-VP1蛋白加強免疫小鼠，探討初免加強方法對EV71 VP1 DNA疫苗的影響；將pcDNA -VP1質粒分別以肌注、電轉2種免疫途徑免疫小鼠，評價不同免疫途徑的免疫效果。試驗結果表明，EV71 VP1、VP2 DNA疫苗在小鼠中能夠誘導產生特異性體液免疫和細胞免疫反應；共同免疫IL-12或GM-CSF基因增強了VP1特異性的抗體水平和脾淋巴細胞的增殖反應，提高了其分泌IFN-Y和IL-4的水平，因此IL-12和GM-CSF基因是EV71 VP1 DNA疫苗很好的免疫佐劑；VP1 DNA初始免疫-VP1蛋白加強免疫明顯增強了VP1特異性的抗體水平和IL-4的分泌水平，顯著提高EV71 VP1 DNA疫苗的體液免疫應答；VP1 DNA疫苗採用肌注免疫效果優於電轉免疫。本課題從佐劑、免疫途徑等方面研究EV71 DNA疫苗的免疫效應，為EV71疫苗的研製和免疫學機制的探討奠定了基礎。