《胰腺導管細胞癌miR-125a與吉西他濱化療敏感性的相關性研究》是依託揚州大學，由姚捷擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：胰腺導管細胞癌miR-125a與吉西他濱化療敏感性的相關性研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：姚捷
- 依託單位：揚州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
胰腺導管細胞癌是目前預後最差的消化道腫瘤之一，多數患者確診時已是晚期，失去手術機會，因此，化療是胰腺癌綜合治療中的重要內容之一。吉西他濱是胰腺癌化療的一線藥物， 但臨床療效一般。通過建立耐藥細胞株，microRNA晶片篩選差異miRNA，螢光定量PCR驗證，通過過表達、低表達miR-125a驗證其在胰腺癌化療耐藥中的作用，我們發現miR-125a在胰腺癌化療耐受中起著重要作用。根據生物信息學推測，結合前期研究結果，我們推測miR-125a可能通過作用於胰腺癌hedgehog信號通路中PTCH1而發揮調節吉西他濱化療敏感性的作用。進一步的研究將包括：過表達、低表達胰腺癌細胞中miR-125a進一步確認其在胰腺癌化療耐藥中的作用，螢光素酶實驗驗證目的基因；體內、體外實驗研究miR-125與吉西他濱化療敏感性的關係；並就其可能的作用機制進行深入的研究。為預判臨床胰腺癌化療敏感性提供新的生物學標記
結題摘要
miR-125a與胰腺癌化療耐藥相關性研究 結題報告摘要 目的：1研究miR-125a在胰腺癌中的表達並進一步驗證其在化療敏感性中的作用。2研究miR-363在胰腺癌中的表達並進一步探討其在胰腺癌侵襲、增殖中的作用。3研究CIP2A在胰腺癌中的表達，探討其在胰腺癌耐藥中的作用及機制。 方法： 1 miR-125a inhibitor、mimic分別轉染胰腺癌SW1990耐藥細胞株及SW1990細胞，CCK-8試劑盒檢測轉染前後不同濃度吉西他濱作用前後的細胞存活率。qRT-PCR,western檢測轉染前後A20表達情況。向胰腺細胞轉染A20 siRNA，檢測干擾前後A20表達變化及細胞耐藥性的變化。Luciferase驗證miR-125a與A20的關係。 2.檢測胰腺癌細胞系及組織中miR-363的表達，miR-363 inhibitor及mimic分別轉染胰腺癌SW1990細胞。測轉染前後細胞增殖、集落形成、細胞侵襲、轉移能力。qRT-PCR及western blot 檢測轉染前後SIRT6表達的變化。Luciferase實驗驗證miR-363與SIRT6的關係。干擾SIRT6，反向驗證miR-363與SIRT6的配對關係。 3.檢測胰腺癌組織及細胞株中CIP2A的表達，分析其與腫瘤分期，預後的關係。構建pshRNA 質粒轉染胰腺癌SW1990細胞及SW1990吉西他濱耐藥細胞，檢測轉染前後細胞對吉西他濱的IC50，檢測不同濃度吉西他濱作用後的細胞凋亡情況。qRT-QCR及western blot 檢測干擾前後CIP2A，p-AKT, BCL2表達的情況。 結果： 1 轉染miR-125a mimic以後，胰腺癌細胞SW1990的耐藥性顯著增強；向SW1990耐藥株轉染miR-125a inhibitor以後，耐藥株的耐藥性明顯減弱。轉染前後靶基因A20在mRNA水平及蛋白水平有明顯表達差異。Luciferase實驗證實miR-125a與A20存在配對關係。 2 miR-363在胰腺癌細胞及組織中低表達；miR-363促進胰腺癌SW1990、Bxpc-3的增殖、侵襲和轉移。SIRT6是miR-363直接的靶基因。敲除SIRT6基因促進胰腺癌細胞分化、增殖及侵襲轉移。胰腺癌中miR-363表達水平與SIRT6表達負相關。 3 胰腺癌組織及細
