《肝癌細胞pH調節蛋白F1F0 ATPase的靶向治療研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由李樹鈞擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：肝癌細胞pH調節蛋白F1F0 ATPase的靶向治療研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：李樹鈞
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
腫瘤的酸性微環境是其發生、發展的關鍵因素，並參與其惡性生物學行為的整體調控。腫瘤細胞膜上的pH調節蛋白是其維持細胞外酸化-細胞內鹼化酸鹼微環境的分子基礎，新近研究顯示腫瘤細胞膜上異位表達F1F0 ATPase複合物的部分亞基。本所發現在肝癌細胞膜上也存在F1F0 ATPase β催化亞基的異位表達，並製備了其抑制性單抗。抑制其活性，可導致肝癌細胞生長抑制、細胞內pH酸化，提示F1F0 ATPase可能參與了肝癌細胞內pH的調節，但其機制不清。本研究擬通過免疫印跡、質譜和雷射共聚焦等方法鑑定肝癌細胞膜表面F1F0 ATPase的異位表達，觀察細胞外酸性環境對其表達及活性的影響；通過抗體、siRNA或阻斷劑等干預手段探討F1F0 ATPase參與肝癌細胞內pH值鹼化的機制及其對肝癌惡性表型的影響。對於深入理解肝癌發生、發展過程的整體調控，發現新的生物治療靶點提供理論基礎和實驗依據。
結題摘要
腫瘤的酸性微環境是其發生、發展的關鍵因素，並參與其惡性生物學行為的整體調控。肝癌細胞膜表面異位表達的F1F0 ATPase可能是其細胞內pH調節的重要分子和生物治療靶點。本項目研究發現：1、利用蔗糖密度梯度離心法和親和兩相分離法，可有效提取純化細胞漿膜，減少線粒體等亞細胞器的污染。2、肝癌細胞表面存在F1F0 ATPase α，β，γ，δ 和 ε亞基等多種亞基的異位表達，並以α和β亞基表達水平最高，α和β亞基可相互識別對方的免疫沉澱產物，表明α和β亞基以複合體形式存在於肝細胞表面。3、利用siRNA干擾技術，抑制α和β亞基表達均可抑制肝細胞漿膜表面的ATP合成活性、引起細胞內pH值的酸化，且在細胞外pH=6.7酸性環境中抑制效果更為明顯。4、利用單克隆抗體技術，我們自主製備的抗體mAb6F2C4為F1F0 ATPase β催化亞基的抑制性單抗，mAb6F2C4可以特異性地阻斷F1F0 ATPase的ATP合成活性，並成濃度依賴性；在細胞外pH=6.7酸性培養環境下，mAb6F2C4單抗可抑制肝癌細胞細胞表面ATP的合成，進而抑制肝癌細胞的生長，裸鼠體內成瘤實驗也發現局部注射mAb6F2C4抗體可顯著抑制SMMC-7721肝癌細胞的成瘤能力。因此，F1F0 ATPase複合物是肝癌細胞細胞內pH調節的重要分子，其亞基，特別是β催化亞基是肝癌治療重要的生物治療靶點。
