《肝癌相關Treg細胞表面特徵性聚糖譜及酶學基礎的研究》是依託復旦大學，由陳培擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：肝癌相關Treg細胞表面特徵性聚糖譜及酶學基礎的研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：陳培
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
Treg細胞具有負調節機體免疫反應功能，是肝癌免疫調節的一個重要方面。研究肝癌相關Treg細胞表面特徵性聚糖譜和糖基轉移酶調控機制對其細胞功能的影響,就可以從糖生物學角度揭示Treg細胞在肝癌發生髮展過程中的作用。本研究使用凝集素晶片和糖基轉移酶晶片，高通量、整體上檢測肝癌相關Treg細胞表面特徵性聚糖譜及糖基轉移酶譜調控機制，進而研究肝癌相關Treg細胞特徵性糖基化對其趨化、增殖、免疫調節等生物學特性的影響，探索Treg細胞特徵性糖基化及糖基轉移酶調控機制對肝癌診斷、治療的理論和實踐意義。本研究預期成果將從糖生物學角度為肝癌的診斷和治療提供新的思路，為肝癌免疫相關藥物靶點的設計及肝癌發生髮展糖組學分子機理的全面闡明提供理論和實驗上的依據，對於肝癌的預防、監測、預後判斷具有十分重要的意義。
結題摘要
本研究首次採用四色螢光標記流式細胞儀分選出CD4+CD25+CD127low/-CD49d- Treg細胞，獲得有活性、FoxP3高表達、高純度Treg細胞，可體外培養用於下游實驗。研究發現HCC患者外周血Treg細胞占整個CD4+ T細胞比例顯著高於健康對照，HCC癌灶Treg細胞數量顯著高於癌旁對照，而且表達較高的免疫抑制表型，免疫抑制功能也更強，擴增後的細胞仍保持較高抑制表型。使用Agilent全基因晶片雜交結果顯示HCC癌灶浸潤Treg細胞相對於癌旁肝組織浸潤Treg細胞共有1032個基因表達上調，1357個基因表達下調。GO分析顯示癌灶浸潤Treg細胞相對於癌旁肝組織Treg細胞有431條GO條目上調，237條GO條目下調。PATHWAY結果顯示兩組間有7條上調通路和9條下調通路差異，錨定糖基化磷脂醯肌醇通路、唾液酸分泌通路涉及到HCC相關Treg細胞的糖基化改變。構建凝集素晶片檢測Treg細胞膜表面特徵性聚糖譜，發現HCC患者外周血Treg細胞與健康對照組相比，表面α1-6岩藻糖、α1-6甘露糖、GalNac、β型半乳糖鏈、複雜型N-聚糖增加。研究也提示HCC微環境中的galectin-1可能促進Treg在HCC中擴增，進而影響HCC預後。凝集素晶片顯示肝癌細胞株HCCLM3相對於Hep3B，代表唾液酸MAL-Ⅰ&II等、代表岩藻糖PSA、LCA等、代表甘露糖ConA、GNA等、代表GlcNAc的PHA-L等凝集素點信號明顯增加；代表半乳糖鏈BPL、EEL等凝集素點信號增加。糖基轉移酶PCR晶片顯示HCCLM3較Hep3B，ST3Gal1、FUT8和MGAT5等轉移酶表達增高。ST3Gal1對MAL-Ⅰ&II，FUT8對PSA、LCA， MGAT5對PHA-L，不同轉移潛能肝癌細胞株糖基轉移酶表達符合其特徵性糖基化差異，因此細胞功能也受糖基轉移酶ST3Gal1、FUT和MGAT5等調控。HCC細胞表面糖基化改變，可能使HCC細胞表面性質變化及細胞分泌因子或蛋白改變，是造成HCC細胞粘附、侵襲和轉移能力增強的重要原因。HCC相關Treg細胞膜相似的特徵性糖基化和細胞免疫抑制功能變化，提示同樣情況也可能發生在Treg細胞，唾液酸轉移酶ST3Gal1和岩藻糖轉移酶FUT8之間相互作用的免疫信號通路可能對HCC細胞免疫逃逸也起著重要的作用。
