肝外膽管癌miR-373和DNA甲基化雙向調控機制及生物學效應

《肝外膽管癌miR-373和DNA甲基化雙向調控機制及生物學效應》是依託華中科技大學，由陳勇軍擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：肝外膽管癌miR-373和DNA甲基化雙向調控機制及生物學效應
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：陳勇軍
• 依託單位：華中科技大學

中文摘要

microRNA(微小RNA)和DNA甲基化，都是在不改變DNA序列的條件下調控基因表達，具有腫瘤特異性和可逆性。研究顯示，miRNA和DNA甲基化相互調控，但機制不清楚。肝外膽管癌預後極差，其中miR-373特異性表達降低，DNA甲基化轉移酶3b(DNMT3b)和甲基化CpG結合蛋白2(Mecp2)表達升高。生物信息學分析發現，miR-373基因啟動子含有CpG島，DNMT3b和Mecp2的3'-UTR含有miR-373理論結合位點。因此，本項目擬一方面分析miR-373基因是否在DNMT3b和Mecp2作下，啟動子發生甲基化而失活；另一方面分析miR-373能否作用於DNMT3b和Mecp2，抑制其生物活性，以剖析miRNA和DNA 甲基化雙向調控機制；並以實驗數據為依據，分析聯合miRNA和脫甲基化藥物對腫瘤細胞的抑制效應，探索肝外膽管癌分子干預的新策略。

結題摘要

microRNA(微小RNA)異常表達與特定腫瘤組織及臨床特徵相關。研究表明部分miRNA基因的CpG島通過甲基化介導基因沉默。甲基CpG結合蛋白（MBP）通過結合甲基化的CpG二核苷酸抑制轉錄。本課題研究顯示miR-373能夠抑制膽管癌細胞生物學行為。通過生物信息學分析，預測miR-373基因啟動子CpG島片段長度為402bp，其中包含26個CpG位點和轉錄起始位點（TSS）。本研究擬明確miR-373在肝門部膽管癌中的表觀遺傳學調控機制。Taqman miRNA assay技術檢測發現miR-373在肝門部膽管癌組織中低表達與腫瘤細胞低分化、高臨床分期、總生存時間和無病生存時間相關。甲基化分析表明啟動子CpG島高甲基化抑制miR-373基因表達。染色質免疫共沉澱（ChIP）實驗表明，miR-373低表達能選擇性募集MBD2至甲基化的CpG島。相反，運用siRNA技術敲低MBD2後能夠促進miR-373表達。套用脫甲基化藥物5-Aza-CdR和乙醯化酶抑制劑TSA使miR-373再表達後能夠降低MBD2在CpG島區域的募集量。穩定轉染pGL4-m373-Prom的膽管癌細胞株QBC939中MBD2在CpG島區域的募集量增加。我們的研究表明在肝門部膽管癌的發生和進展中，miR-373基因靶向MBD2基因3-UTR區並負性調節MBD2基因表達，進而調控啟動子CpG島甲基化。