耐輻射奇球菌特有DNA損傷修復基因ddrB功能分析

《耐輻射奇球菌特有DNA損傷修復基因ddrB功能分析》是依託浙江大學，由許光治擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：耐輻射奇球菌特有DNA損傷修復基因ddrB功能分析
• 依託單位：浙江大學
• 項目負責人：許光治
• 項目類別：青年科學基金項目

項目摘要

ddrB是一個電離輻射後被大量誘導轉錄的耐輻射奇球菌特有的修復基因，在耐輻射奇球菌極端輻射抗性中發揮了非常重要的作用，但其具體的功能和作用機制還不清楚，為此本申請將通過體外生化研究確定DdrB蛋白的主要生物化學功能，通過體內及體外研究確定ddrB和耐輻射奇球菌中已知的DNA損傷修復基因（ssb、recA、recQ、recO、recR、recF等）的關係。同時鑑定出體內與DdrB相互作用的蛋白，通過體內及體外研究確定互作蛋白對ddrB生物學功能的影響。本課題的目的是通過上述研究來闡明ddrB基因在耐輻射奇球菌DNA損傷修復中作用。通過本研究詳細說明ddrB基因作用的分子機制以及其在耐輻射奇球菌DNA損傷修復中的地位，這將為闡明耐輻射奇球菌高效修復系統的分子機制，以及潛在的新型生物抗逆種質資源的開發、污染環境的生物修復等方面的套用提供有價值的理論依據。

結題摘要

過去的3年，我們按照計畫書研究內容，開展了相關工作，取得了一些研究成果，對耐輻射球菌特有修復基因ddrB的功能也有了更加全面的認識。DdrB蛋白和SSB蛋白類似，是單鏈DNA特異性結合蛋白。但我們發現DdrB和SSB兩者的功能又有差別，DdrB除了單鏈DNA結合活性還有促進互補單鏈DNA退火活性。同時DdrB和SSB在體外可以互作。然後我們又重點分析了DdrB和SSB與單鏈DNA的關係，發現SSB和短的單鏈DNA有優勢；而對於長的單鏈DNA，兩者存在競爭關係，可以相互取代。另外，DdrB可以抑制RecJ的核酸酶活性，而SSB則相反。這些結果預示了他們體內功能的差異。 通過體內串聯純化技術-TAP和體外pull-down技術，我們也篩選到了一些和DdrB蛋白可能互作的蛋白，其中大部分蛋白都是功能未知蛋白。特別有意思的是DdrB和複製蛋白DnaB存在互作。這些蛋白和DdrB的互作及體內功能還有待於以後實驗的驗證和研究。 這些結果為以後進一步解析耐輻射球菌DdrB功能提供了參考