維生素D影響卵巢癌幹細胞特性獲得及體內致瘤性的研究

項目摘要

維生素D在腫瘤防治中的作用逐漸引起人們重視。大量研究報導血清25羥維生素D水平與卵巢癌發病率存在負相關。腫瘤幹細胞理論為人們重新認識腫瘤的起源和治療提供了新的方向和視角。課題組前期的工作發現維生素D可以抑制DMBA誘導的小鼠卵巢表面上皮細胞惡性轉化和卵巢癌發生。而且，在卵巢表面上皮細胞培養過程中，我們發現了卵巢癌幹細胞標誌物CD44的表達。在此基礎上，本項目一方面在卵巢表面上皮細胞惡性轉化過程中尋找腫瘤幹細胞；另一方面分離培養人卵巢癌細胞株SKOV-3和卵巢癌患者腫瘤組織中的腫瘤幹細胞，在此基礎上研究維生素D對這三種卵巢癌幹細胞特性獲得和在祼鼠體內成瘤性的影響，並探討VDR/beta-catenin/TCF4信號通路與維生素D作用的關係。揭示維生素D抑制或延緩卵巢癌發生與卵巢表面上皮細胞惡性轉化的機理，為卵巢癌防治措施提供實驗基礎。同時，開發維生素D的新功能，豐富營養與腫瘤學研究內容。

結題摘要

維生素 D 在腫瘤防治中的作用逐漸引起人們重視。大量研究報導血清 25 羥維生素D水平與卵巢癌發病率存在負相關。因為周期性排卵啟動的卵巢表面上皮細胞修復、在與輸卵管交接部位發現的cancer-prone stem cell niche、以及上皮型卵巢癌的多種類型等原因，上皮型卵巢癌被認為是腫瘤幹細胞起源的疾病。為了研究維生素 D對卵巢表面上皮細胞(Mouse ovarian surface epithelial, MOSE)自發惡性轉化過程中腫瘤幹細胞特性的影響，我們主要開展了以下三方面研究。第一，研究維生素D減少MOSE細胞惡性轉化過程中腫瘤幹細胞特性獲得。實驗發現，隨著MOSE細胞的惡性轉化過程，MOSE細胞中腫瘤幹細胞的比例和自我更新能力逐漸增加，多能幹細胞相關基因NANOG和SOX2的mRNA表達水平也逐漸上升。活性維生素D長期處理可以顯著降低惡性轉化的卵巢表面上皮細胞的幹細胞比例和自我更新能力、以及NANOG轉錄水平。第二，研究維生素D對卵巢癌幹細胞特性的影響。懸浮球形成和限制性稀釋的實驗結果表明，活性維生素D可以顯著降低卵巢癌幹細胞的自我更新能力。活性維生素D也明顯降低Notch1和KLF4的轉錄水平。存活曲線結果表明活性維生素D不僅增加非卵巢癌幹細胞對X射線的敏感性，也增加卵巢癌幹細胞對X射線的敏感性。體內實驗發現，對照組CD44+/CD117+細胞最多需要100個即可導致裸鼠體內成瘤，而維生素D處理組CD44+/CD117+細胞體內成瘤則需要445個。說明維生素D可以降低腫瘤幹細胞樣細胞體內致瘤能力。第三，研究VDR/β-catenin通路在維生素D抑制卵巢癌幹細胞特性的作用。免疫螢光實驗發現活性維生素D促進細胞核VDR表達增加，減少β-catenin從細胞質轉移至細胞核，免疫共沉澱實驗證實活性維生素D增加VDR與β-catenin直接結合，從而減少β-catenin向細胞核內的轉移。總之，本研究結果表明維生素D抑制卵巢表面上皮細胞惡性轉化，與其減少腫瘤幹細胞比例和自我更新能力以及多能幹性相關基因表達有關。而且維生素D還可以直接抑制卵巢癌幹細胞特性，減少其在裸鼠的致瘤性。本研究結果為維生素D用於上皮型卵巢癌的防治研究提供了可靠的實驗數據。

維生素D影響卵巢癌幹細胞特性獲得及體內致瘤性的研究

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