結核分枝桿菌Rv0927c蛋白抑制炎症應答的分子機制

《結核分枝桿菌Rv0927c蛋白抑制炎症應答的分子機制》是依託揚州大學，由徐正中擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：結核分枝桿菌Rv0927c蛋白抑制炎症應答的分子機制
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：徐正中
• 依託單位：揚州大學

項目摘要

結核分枝桿菌為重要的人獸共患病原菌，其產生抑炎效應在內的多種免疫逃逸策略，從而引起潛伏感染或疾病發生，前期研究顯示結核分枝桿菌Rv0927c蛋白可以抑制宿主炎症應答，但是其分子機制還不清楚。本研究通過原核表達Rv0927c重組蛋白，並構建牛分枝桿菌BCG Rv0927c基因缺失株及表達Rv0927c的重組恥垢分枝桿菌作為研究材料。通過體外、體內試驗，分別從蛋白水平和轉錄水平探討Rv0927c蛋白對於宿主炎症應答的抑制效應及其規律，以此為切入點，套用Rv0927c序列全覆蓋重疊多肽，探究其發揮抑炎效應的功能區域。隨後，進一步分析Rv0927c蛋白發揮抑炎效應過程中所依賴的信號通路，以及重要信號分子的調控作用，並運用Co-IP技術篩選驗證Rv0927c蛋白發揮抑炎效應的互作蛋白。通過對結核分枝桿菌Rv0927c蛋白的抑炎效應及其分子機制研究，將為進一步闡明結核分枝桿菌的免疫逃逸機制提供新認識。

結題摘要

結核分枝桿菌為重要的人獸共患病原菌，其產生抑炎效應在內的多種免疫逃逸策略，從而引起潛伏感染或疾病發生，前期研究顯示結核分枝桿菌Rv0927c蛋白可以抑制宿主炎症應答，但是其分子機制還不清楚。 本研究以結核分枝桿菌Rv0927c為研究對象，首先成功構建結核分枝桿菌Rv0927c真核表達重組質粒、原核重組Rv0927c蛋白、過表達Rv0927c重組恥垢分枝桿菌，以及恥垢分枝桿菌基因缺失株，為後續研究提供必要生物材料。Rv0927c在細菌和感染後宿主細胞內定位研究結果顯示Rv0927c蛋白主要表達於分枝桿菌的胞質和膜組份中；通過將過表達重組恥垢分枝桿菌感染巨噬細胞、以及將真核質粒轉染至HEK293細胞後進行雷射共聚焦胞內定位分析，結果顯示Rv0927c定位於細胞漿內和核內。通過對結核分枝桿菌Rv0927c蛋白抑制宿主炎性效應進行了研究，結果顯示真核表達質粒轉染顯著抑制PGN、LPS誘導的NF-κB信號通路活化、以及炎性因子分泌表達；重組Rv0927c蛋白刺激巨噬細胞可以抑制LPS誘導的細胞炎性因子表達；過表達Rv0927c重組恥垢分枝桿菌在體外實驗、體內實驗中均顯著抑制小鼠巨噬細胞炎性因子的表達，同時Rv0927c蛋白提高細菌胞記憶體活和體內載量。進一步對結核分枝桿菌Rv0927c蛋白抑制宿主炎性效應分子機制進行探究，結果顯示結核分枝桿菌Rv0927c通過降低p65、IκBα、p38、ERK1/2的磷酸化水平來抑制NF-κB、MAPK信號通路的活化。通過酵母雙雜交技術篩選Rv0927c蛋白互作靶蛋白的篩選及驗證，確定了結核分枝桿菌Rv0927c蛋白27個候選靶蛋白，為後續深入研究提供了線索。 通過對結核分枝桿菌Rv0927c蛋白的抑炎效應及其分子機制研究，將為進一步闡明結核分枝桿菌的免疫逃逸機制提供新認識。