紅色諾卡氏菌細胞壁骨架在製備抗人乳頭瘤病毒藥物的用途

《紅色諾卡氏菌細胞壁骨架在製備抗人乳頭瘤病毒藥物的用途》是遼寧格瑞仕特生物製藥有限公司於2005年9月23日申請的專利，該專利申請號為2005101055337，公布號為CN1935262，公布日為2007年3月28日，發明人是張策、張軼、洪曉明、張國英、趙健。

《紅色諾卡氏菌細胞壁骨架在製備抗人乳頭瘤病毒藥物的用途》涉及紅色諾卡氏菌細胞壁骨架的用途，特別是在製備抗人乳頭瘤病毒藥物的新用途。

2021年6月24日，《紅色諾卡氏菌細胞壁骨架在製備抗人乳頭瘤病毒藥物的用途》獲得第二十二屆中國專利優秀獎。

基本介紹

• 中文名：紅色諾卡氏菌細胞壁骨架在製備抗人乳頭瘤病毒藥物的用途
• 公布號：CN1935262
• 申請人：遼寧格瑞仕特生物製藥有限公司
• 發明人：張策、張軼、洪曉明、張國英、趙健
• 類別：發明專利
• 申請號：2005101055337
• 申請日：2005年9月23日
• 公布日：2007年3月28日
• 地址：遼寧省瀋陽市東陵區文體東路7號
• 代理機構：北京紀凱智慧財產權代理有限公司
• 代理人：程偉
• Int. Cl.：A61K45/00(2006.01); A61K39/02(2006.01); A61K9/00(2006.01); A61P31/20(2006.01)

專利背景

人乳頭瘤病毒屬於DNA病毒，人體皮膚及黏膜的復層鱗狀上皮是其唯一宿主，截至2005年9月尚未在體外培養成功。人乳頭瘤病毒能引起人的皮膚和黏膜的多種良性乳頭狀瘤或疣，其中有些型別具有潛在的致癌性。

截至2005年9月，已確定HPV病毒型別大約有120餘種。依其感染的上皮所在部位分為皮膚型HPV和生殖道型HPV。約35種型別可感染婦女生殖道，約20種與腫瘤相關。根據不同型別HPV與引發腫瘤的危險程度，又分為高危型HPV和低危型HPV。如低危型HPV有：HPV6、11、42、43、44、CP8304等型，可引發外生殖器濕疣等良性病變，包括宮頸上皮低度病變（CIN-I），高危型HPV有：HPV16、18、31、33、35、45、51、52、56、58、59、68等型，可引發宮頸上皮高度病變（CIN-II、CIN-III）及宮頸癌，尤其是HPV16、18型。

HPV病毒感染是一種世界上最常見的性傳播疾病，與性行為因素相關。特別是HPV病毒感染是宮頸癌的重要病因，這一點已得到世界行內公認。所以人乳頭瘤病毒感染嚴重危及人類的健康，甚至危及生命。

全世界婦女中，每年約有10％-15％的新感染病例，在大多數國家，HPV病毒感染非常常見。年輕的性活躍婦女HPV病毒感染率最高，感染的高峰年齡在18-28歲。大部分婦女HPV感染期比較短，一般在8-10個月左右便可消失。但仍有10％-15％的35歲以上的婦女有持續感染的情況。這些持續感染HPV的婦女則成為宮頸癌的高危人群。

據相關資料，全球有HPV感染者達到6.3億人，僅美國就有2000萬感染者。另外，在美國每年有550萬人新被診斷患有HPV感染，其中100萬人以上表現為生殖器疣。HPV感染已成為公共衛生問題。

世界衛生組織的統計資料表明，宮頸癌在全球婦女癌症死亡率中位居第二，在一些開發中國家甚至居於首位。每年全球有50萬例新發宮頸癌病例，約20萬人死於宮頸癌，其中80％的死亡發生在開發中國家。宮頸癌占開發中國家婦女惡性腫瘤的24％，在已開發國家則占7％。進入21世紀，宮頸癌正在成為影響全球婦女健康的重大疾病之一。

據不完全統計，截至2005年9月，中國有宮頸癌病人約13.8萬，每年約有5萬人死於宮頸癌，占世界宮頸癌新發病例總數的四分之一。但令專家們苦惱的是，由於早期篩查工作尚不完美，大量的宮頸癌患者往往都是在晚期被發現的，失去了寶貴的早期治療機會，而且已出現宮頸癌年輕化的趨勢。

HPV病毒感染的預防和治療。HPV尚無特異預防方法，只能根據HPV傳染方式，切斷傳播途徑，是有效預防措施。

一般HPV傳染後小的皮膚疣有自行消退的可能，一般無需處理。

但是因尖性濕疣病損範圍大，可施手術，但常規外科手術切除有較高復發率。亦可用物理療法電烙療法、雷射治療等。

首先世界上尚無有效抗HPV病毒感染藥物。治療宮頸癌也是沒有可靠的藥物療法。但是宮頸癌是第一個明確病因的癌症，而且其篩查方法日趨成熟，完全有可能通過普遍的篩查，實現早預防、早發現、早治療。並且很有可能宮頸癌是人類征服的第一個癌症。

其次，世界上各國主要都是通過研發“疫苗”的方式，對人體免疫接種特異性疫苗來預防和治療宮頸癌。因為通過使用疫苗，特別是聯合免疫疫苗來刺激患者的機體產生強有力的免疫反應，從而達到清除HPV病毒感染和手術殘餘的癌細胞。

中國國內外預防和治療HPV病毒的疫苗情況是：

1、預防性疫苗是病毒樣顆粒疫苗，做為HPV預防性疫苗的靶抗原，是HPV的主要衣殼蛋白L1和次要蛋白L2。因L1和L2表達蛋白可自我裝配形成病毒樣顆粒，與天然病毒顆粒的空間結構和抗原表位十分相似，且不含HPV DNA。截至2005年9月，經過多種動物模型實驗，獲得理想免疫效果。並且也通過I/II期臨床試驗，正在籌劃在歐洲III/IV期臨床試驗。

2、預防兼有治療的疫苗是嵌合病毒樣顆粒，做為兼有預防和治療功能疫苗是由L1衣殼蛋白和E7多肽組成E7嵌合病毒顆粒。這些嵌合病毒樣顆粒不但能使機體產生中和抗體，而且還能誘導機體產生較強的E7特異性CTL反應和抗腫瘤活性。一種包括HPV16型L1、L2和E7靶抗原的嵌合病毒樣顆粒疫苗，將要進入I期臨床。

3、治療用疫苗有痘苗病毒載體疫苗，做為曾用於消滅人類天花的痘苗病毒是最為常用的病毒載體，其具有長期、大規模人類接種史。英國曾用表達HPV16型和HPV18型的E6和E7蛋白以及重組痘苗病毒疫苗進行了宮頸癌治療的一期臨床試驗，沒發現明顯副作用，在部分受試病人體內可檢測到特異性抗體和CTL反應以及細胞因子，其在不同個體中的反應各不相同，可能與癌症病期有關。缺點是有可抑制再免疫。

4、治療用疫苗還有多肽疫苗。在許多抗原研究中，由CTL識別的抗原決定簇被確定，這為開發多肽疫苗提供了可能。因此用HPV16型E6或E7多肽免疫，有可能增強腫瘤特異性CTL的產生。用HPV型E7多肽疫苗免疫HPV相關腫瘤已進入I/II期臨床試驗，試驗中未見有明顯副反應。但存在不同遺傳背景的個體需要使用與接種對象的HLA相匹配的多肽疫苗。

5、治療用疫苗還有DNA疫苗。DNA疫苗是將插入目的基因的表達質粒導入體內，通過在人體內表達抗原而引起人體的特異性免疫反應。用於治療HPV的DNA疫苗的基因多為HPV16型E7基因，這一經肌肉注射途徑免疫的疫苗正在進行I/II期臨床試驗。但DNA疫苗在人體免疫中免疫效果弱和安全性的問題須引起注意。

中國的HPV疫苗的研製情況，在預防性疫苗的研製方面，已完成了HPV16型L1和L1/L2重組桿狀病毒疫苗株的構建，並在昆蟲細胞中進行了表達；在電鏡下觀察到病毒樣顆粒的形成；成功地構建了L1/L2均表達的重組複製型和非複製型痘苗病毒疫苗株。在治療性疫苗的研製方面，已構建了表達HPV16型E6/E7蛋白的重組複製型和非複製型痘苗病毒疫苗株。

總之，採用疫苗防治HPV和宮頸癌是世界共認的主攻方向，給人們帶來希望。但也因為正式走向臨床，尚須時日。另外導致宮頸癌的HPV病毒有許多種，截至2005年9月的研究基本上都集中在HPV16型，套用上還有局限，以及接種還有年齡階段限制。所以人們也期盼能有更好的更安全綜合性新藥及治療方法問世。

而紅色諾卡氏菌細胞壁骨架製劑是該領域技術人員公知的一種藥物製劑，公知技術中使用紅色諾卡氏菌細胞壁骨架製劑製備抗真菌，例如白色念珠菌感染感染引起的疾病的藥物，還其涉及採用這種製劑治療宮頸糜爛，抗單純皰疹病毒和帶狀皰疹病毒等等。但是未見有報導紅色諾卡氏菌細胞壁骨架製劑能夠用於治療人乳頭瘤病毒（HPV病毒）感染。

發明內容

專利目的

《紅色諾卡氏菌細胞壁骨架在製備抗人乳頭瘤病毒藥物的用途》的目的在於提供一種藥物製劑，其含有紅色諾卡氏菌細胞壁骨架以及藥學上可接受的載體，用於治療人乳頭瘤病毒（HPV病毒）感染。

技術方案

《紅色諾卡氏菌細胞壁骨架在製備抗人乳頭瘤病毒藥物的用途》提供一種紅色諾卡氏菌細胞壁骨架在製備抗人乳頭瘤病毒藥物的套用，所述的抗人乳頭瘤病毒藥物包括作為有效成分的紅色諾卡氏菌細胞壁骨架和藥學上可接受的載體。所述的載體包括賦形劑，優選為右旋糖酐。

在《紅色諾卡氏菌細胞壁骨架在製備抗人乳頭瘤病毒藥物的用途》中，所述藥物為局部用藥物劑型，其包括軟膏劑、乳膏劑、硬膏劑、凝膠劑、洗劑、酊劑、搽劑、油劑、糊劑、氣霧劑，優選為洗劑、酊劑、搽劑。所述藥物是每1毫升或者每豪克藥物中含有0.001-1毫克所述的紅色諾卡菌的細胞壁骨架產物。

紅色諾卡製劑用於抗HPV病毒感染，其藥效機理是科學的。既針對病毒致病機理，也適合紅色諾卡製劑的免疫調節的特性，從而驗證了紅色諾卡製劑調節免疫清除HPV病毒的藥效作用。

在眾多患HPV病毒感染者中，大部分人能夠在一定時間內，通過自身良好的免疫能力，完全清除HPV病毒的感染。但也有一少部分人，因自身免疫能力低下，而導致HPV病毒長期感染而致進一步的病變。所以，在這裡病人自身免疫能力的強弱成為關鍵因素。或者換句話說，能否調節人體免疫能力成為能否戰勝HPV病毒的關鍵。

多年來的研發實踐證明，紅色諾卡製劑是一個非特異性免疫調節劑，特別在人體皮膚上和黏膜系統具有更加明顯的免疫增強作用。

當紅色諾卡製劑作用病變處後，可迅速激活人體的免疫系統，調動大量的巨噬細胞和自然殺傷細胞向病變處聚集，明顯活化巨噬細胞和NK細胞殺滅和吞噬病變細胞的能力。同時誘導產生細胞毒性T淋巴細胞和大量細胞因子，特異性殺滅和清除病毒侵染細胞，並且顯著增強體液免疫能力。

有研究認為：有效的激活CTL在清除HPV感染和HPV病毒感染引起的鱗狀上皮損害中有非常重要的作用。

CIN的消退與抗HPV-16的中和性抗體存在正相關，該抗體可通過抑制複製的HPV再感染細胞，降低病毒載量而阻止HPV相關宮頸損害進一步發展。

有研究表明，有約87％的宮頸癌都發生在移行帶。並且檢測發現HPV轉陰患者要比HPV持續感染者的朗格漢氏細胞含量要高。所以移行帶區域朗格漢氏細胞濃度影響HPV感染程度，而紅色諾卡製劑有利於朗格漢氏細胞增值與活化。

雖然紅色諾卡製劑自身沒有直接的殺滅和清除病毒的作用，但是紅色諾卡製劑調動增強人自身免疫功能來殺滅和清除病毒的作用機制還是科學的、確切的。這種間接的免疫調節作用而產生的藥效機理，恰恰說明了紅色諾卡製劑安全性的原因。

《紅色諾卡氏菌細胞壁骨架在製備抗人乳頭瘤病毒藥物的用途》採用以下方法鑑定所述的紅色諾卡菌的細胞壁骨架產物對治療人乳頭瘤病毒（HPV病毒）感染的效果。

該領域中HPV病毒的檢測方法，通常有如下幾種：

1、細胞學塗片檢測方法

也就是過去通常採用巴氏染色檢測方法，也稱之為塗片檢測方法。就是將採集的宮頸分泌物塗在玻璃片上，用顯微鏡觀察，主要是檢查是否有空泡細胞或角化細胞，檢出率70-76％。

2、膜式液基超薄細胞學檢測方法（TCT）

採取專用刷子在宮頸處取樣，然後利用細胞保存液分離出被採集樣本中雜質，形成超薄的清晰的細胞塗片，能檢測出有沒有HPV病毒，還可確定何別何型。亦稱為TCT。檢出率70-95％。

3、免疫組織化學檢測方法

用HPV免疫動物後，產生的多克隆抗體查組織HPV抗原，採用PAP法顯示病毒蛋白，以證明有病毒抗原。HPV蛋白陽性時，上皮細胞內出現淡紅色的弱陽性反應，在空泡細胞核內見到棕褐色顆粒狀沉著為陽性。但檢測率低40-60％，敏感性不高，不能分型。

4、HPV病毒DNA檢測方法

（1）聚合酶鏈反應PCR：

用刮板或生理鹽水浸潤的棉棒從陰道和宮頸外口取分泌物，經過離心、洗滌等方法提取HPV的DNA，在經PCR擴增和凝膠電泳，觀察電泳與樣本比對即可做出診斷。雖然簡便，但是不能定位，不知病毒死活。

（2）DNA雜交法PCK：

HPV DNA分子雜交技術、CP-14免疫雜交法。用螢光顯微鏡400倍可看到3個以上螢光點為陽性。可以分型，核酸雜交可檢出HPV-DNA序列，PCR檢測可見特異性HPV-DNA擴增區帶，但煩瑣、昂貴。需要一定的設備和條件。

由於《紅色諾卡氏菌細胞壁骨架在製備抗人乳頭瘤病毒藥物的用途》採用紅色諾卡氏菌細胞壁骨架製劑，通過外敷、推注、表皮注射等方式，治療人乳頭瘤病毒（HPV病毒）感染，針對不同病情，經過不同療程均獲得了較好的治療效果。初步試驗，對HPV高危或低危病毒均有療效。

從而證明，採用紅色諾卡氏菌細胞壁骨架製劑可有效治療HPV病毒感染，從而達到預防宮頸癌的目的。並且還為有效治療因HPV病毒引起的性病提供了新的治療方法。為人類全面征服第一個癌症宮頸癌帶來了全新的希望。

《紅色諾卡氏菌細胞壁骨架在製備抗人乳頭瘤病毒藥物的用途》針對宮頸癌的誘發元兇是HPV病毒感染這一關鍵環節。在紅色諾卡製劑抗HPV病毒感染上進行了大量的試驗，並已初步總結出一整套針對抗HPV病毒感染的治療方法，取得了良好的治療效果，探索出一條全新的抗HPV病毒感染的新路子。

改善效果

採用紅色諾卡製劑進行抗HPV病毒感染，有如下幾個顯著特點：

1、安全性好：在治療過程中沒有發現毒副作用，以及不適的感覺。

2、對應性好：局部用藥治療局部病症，避免了全身用藥的身體反應。

3、針對性強：病症表現在表皮與黏膜，而發明藥物又在表皮及黏膜處有良好的增強免疫作用，所以針對性強。

4、非特異性：治療中發現該治療方法對HPV病毒各型感染均有良好拮抗作用。

5、有效性好：在治療病例中，有效率達72.7％，治癒率達45.5％。

6、使用方便，利於推廣。治療時只需簡單的一次性簡便醫療器具即可。

7、立足早字：符合宮頸癌的治療方針，早發現，早治療。

8、預防為主：從抗HPV病毒感染做起，體現預防勝於治療的大方針。

技術領域

《紅色諾卡氏菌細胞壁骨架在製備抗人乳頭瘤病毒藥物的用途》涉及紅色諾卡氏菌細胞壁骨架的用途，特別是在製備抗人乳頭瘤病毒藥物的新用途。

權利要求

1.紅色諾卡氏菌細胞壁骨架在製備抗宮頸人乳頭瘤病毒感染的藥物中的用途，其特徵在於所述藥物是每1毫升或者每毫克藥物中含有0.001-1毫克所述的紅色諾卡菌的細胞壁骨架產物。

2.根據權利要求1所述的用途，其特徵在於所述的藥物包括紅色諾卡氏菌細胞壁骨架和藥學上可接受的載體。

3.根據權利要求2所述的用途，其特徵在於所述的載體包括賦形劑。

4.根據權利要求3所述的用途，其特徵在於所述的賦形劑是右旋糖酐。

5.根據權利要求1所述的用途，其特徵在於所述藥物為局部用藥物。

6.根據權利要求5所述的用途，其特徵在於所述的局部用藥物包括軟膏劑、硬膏劑、凝膠劑、洗劑、酊劑、搽劑或氣霧劑。

7.根據權利要求6所述的用途，其特徵在於所述的軟膏劑為乳膏劑或糊劑；所述的搽劑為油劑。

8.根據權利要求5所述的用途，其特徵在於所述的局部用藥物為洗劑或者搽劑。

實施方式

《紅色諾卡氏菌細胞壁骨架在製備抗人乳頭瘤病毒藥物的用途》首先採用確診HPV病毒感染的方法，對患者進行確診，然後針對HPV病毒感染者採用市售藥物“納可佳”，外塗感染部位，或推注進感染部位，或在感染部位淺表皮注射，可多點微量注射。“納可佳”是一種公知的紅色諾卡氏菌細胞壁骨架組合物（瀋陽勝寶康生物製藥有限公司生產）。

綜合治療方法，20天為一個治療周期，婦女月經期間應停止用藥，一般輕度感染一個周期可治癒，稍重一些的二個周期可轉陰，重一些的三個周期可治癒。對重度感染者亦可配合手術治療。

關於抗HPV病毒感染的臨床試驗，選擇有HPV病毒感染的女性，年齡在26-46歲之間既有HPV低危型病毒感染，也有HPV高危型病毒感染。這個年齡段均屬高危易感染人群，特別是超過30歲後通常不易自愈。實驗組用藥次數和間隔時間略有不同，一般均在月經停止後開始用藥，在第二次月經乾淨後復檢。治療期間要求不要有性生活，如難以避免，性伴侶一定要用安全套。對照組則不做任何治療，但做同期觀察和檢測。按要求堅持治療完整療程的實驗組有11例，堅持觀察全過程的對照組有5例。其中，

實驗組

（1）套用《紅色諾卡氏菌細胞壁骨架在製備抗人乳頭瘤病毒藥物的用途》的藥物治療HPV感染實驗組11例患者，其中有5例轉陰，3例減少1型感染。3例無變化。

（2）對於實驗組3例無變化病例，分析可能是病毒感染較重，用藥時間又短，次數也少，如接續治療或者應有好的效果。

（3）實驗組統計：治癒率45.5％，有效率72.7％。涉及轉陰HPV6、11、16、31、56、58、59七個型。其中高危5個占71.4％，低危2個占28.6％。

（4）其中003病例新增病毒疑似新感染。

對照組

（1）對照組病例實驗期間不做任何治療，僅做觀察記錄。

（2）對照組參照實驗組檢測方法檢測。

（3）對照組參照實驗組年齡結構，也選擇年齡偏大一些病人。

（4）實驗期間，對照組5個病例經檢測，HPV陽性均沒有變化。

納可佳治療HPV感染實驗組預實驗結果見表1，而納可佳治療HPV感染對照組預實驗結果見表2。

表1 納可佳治療HPV感染實驗組預實驗結果一覽表

序號	姓名代號	年齡	HPV感染型別	用藥途徑	治療方法	次數	用藥時間段	第一次月經乾淨3-7天	第二次月經乾淨
1	WLJU	37	58	宮頸外敷	隔日	6	3/8-3/18	陰性	陰性
2	CHNI	45	CP8304	宮頸外敷	隔日	6	3/16-4/3	CP8304	CP8304
3	ZLYI	26	66	宮頸外敷	隔日	10	3/16-3/26	66	66/68
4	TXYA	46	56	宮頸外敷	隔日	6	3/18-3/28	陰性	陰性
5	QIXU	41	66	宮頸外敷	隔日	6	3/18-4/9	66	66
6	WAYA	39	Jun-59	宮頸外敷	連續	24	4/20-5/13	陰性	陰性
7	LIPI	26	31/33/59	宮頸外敷	連續	14	4/20-5/3	31/33	31/33
8	WYME	44	11/CP8304	宮頸外敷	連續	22	4/20-5/11	CP8304	CP8304
9	XFYI	42	16	宮頸注射	連續	20	7/10-8/12	陰性	陰性
10	HDME	43	31	宮頸注射	隔日	6	7/19-8/16	陰性	陰性
11	XYLI	26	31/58(CIN-I)	宮頸注射	隔日	10	7/6-8/4	58	58

表2 納可佳治療HPV感染對照組預實驗結果一覽表

序號	姓名代號	年齡	HPV感染型別	觀察時間	第一次月經乾淨	第二次月經乾淨
101	ZHPP	41	58	5/7-6/16	58	58
102	ZHXY	45	56	6/1-7/5	56	56
103	WALI	30	11	6/18-7/29	11	11
104	LINA	38	52	6/6-7/15	52	52
105	GLXA	27	6	7/1-8/3	6	6

專利榮譽

2021年6月24日，《紅色諾卡氏菌細胞壁骨架在製備抗人乳頭瘤病毒藥物的用途》獲得第二十二屆中國專利優秀獎。