《磷脂爬行酶1抑制HBV複製的分子機制研究》是依託中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院，由楊靜擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：磷脂爬行酶1抑制HBV複製的分子機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：楊靜
- 依託單位：中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
HBV感染可導致肝炎、肝硬化和肝細胞癌，目前無特效治療藥物,關鍵問題在於HBV感染致病機制不清楚。本實驗室前期研究結果顯示磷脂爬行酶1（PLSCR1）與HBsAg具有相互作用，且在體內外具有顯著的抑制HBV複製的作用，提示PLSCR1在HBV感染中具有重要作用。本項目擬在前期工作基礎上，深入研究PLSCR1與HBV複製的關係，並通過研究PLSCR1對HBV複製周期的影響、對細胞功能以及HBV相關細胞信號通路的影響、與HBsAg相互作用對HBV感染複製的影響等，揭示PLSCR1調控HBV複製的分子機制，為研究HBV宿主相互作用奠定基礎，為臨床HBV治療提供新的思路。該研究對於闡明HBV感染致病機理、促進新型抗HBV藥物研發具有重要的科學價值和現實意義。
結題摘要
本課題根據前期研究結果，採用多種藥理、分子生物學手段進一步確證PLSCR1與HBV複製的關係，並揭示PLSCR1抑制HBV複製的分子機理。首先研究PLSCR1與HBV複製的關係，本課題研究發現PLSCR1在HBV陽性細胞中表達顯著低於HBV陰性細胞、且在HBV1.3瞬時轉染HepG2細胞中表達降低具有時間依賴性；進一步在細胞內高表達PLSCR1，發現在HBV1.3瞬時轉染HepG2細胞及Huh7細胞中可顯著降低細胞培養液及細胞中HBsAg、HBeAg、HBV DNA的表達水平以及降低細胞內HBcAg的表達水平；在IFN處理HBV1.3瞬時轉染細胞採用PLSCR1 siRNA發現可抑制IFN的抗HBV作用；套用HBV小鼠水動力模型評價發現PLSCR1在體內具有抑制HBV複製的作用，通過以上結果，本課題進一步深入確證了PLSCR1與HBV複製的關係。 在闡明PLSCR1抑制HBV複製的分子機制方面，本課題首先研究了PLSCR1的亞細胞定位，發現大部分PLSCR1在細胞漿/膜中表達，只有少量表達在細胞核中，對細胞功能的研究結果顯示高表達PLSCR1對HepG2細胞的細胞周期、細胞增殖、細胞凋亡以及對HepG2細胞釋放LDH均無顯著影響；對HBV生命周期的影響檢測結果顯示主要抑制了HBV的DNA和RNA水平，進一步研究顯示PLSCR1可抑制HBV的啟動子活性，提示PLSCR1主要抑制了HBV的複製階段；對信號通路的研究結果顯示PLSCR1一方面可能通過影響IFN誘導的Jak/stat信號通路抑制HBV的複製，另外還可能通過影響了HBV複製關鍵轉錄因子PPARA的表達抑制HBV啟動子活性從而抑制HBV的複製，進一步通過表達譜晶片技術篩選並經驗證還發現PLSCR1可能通過影響固有免疫識別受體TLR9影響HBV的複製。PLSCR1與HBsAg相互作用研究結果顯示PLSCR1可能通過其31-156AA位置與HBsAg結合，高表達PLSCR1可促進細胞對HBsAg的粘附，提示PLSCR1可能在HBV感染進入過程中也具有重要作用。 上述研究結果確證了PLSCR1對HBV的抑制作用，並全面闡明了PLSCR1抑制HBV複製的分子機制，對於進一步研究PLSCR1生物活性以及抗HBV藥物的開發有重要意義。
