甲硝唑、二甲硝唑和洛硝噠唑是屬於常用硝基咪唑類藥物，用於預防和治療特定病菌和原生動物疾病。由於硝基咪唑類化合物具有潛在的致癌性、誘導有機突變性，故歐盟和我國已禁止在任何動物源性食品中使用該類藥物。目前測定硝基咪唑類的方法主要有氣相色譜法和氣相色譜質譜聯用法、高效液相色譜法和高效液相色譜質譜聯用法。但因這些檢測方法投入成本高，檢測時間長，方法複雜，現階段不適宜在我國廣泛推廣使用。我公司研製出硝基咪唑類ELISA快速檢測試劑盒，其方法簡單，時間短，檢測成本低，相比市面上的同類國產和進口產品，不僅價格低廉，質量還具有絕對優勢，具有穩定性強，檢測結果重複率高的特點。
基本介紹
- 中文名：硝基咪唑酶聯免疫檢測試劑盒
- 名詞領域：藥物測驗
- 作用：檢測出蜂蜜中的硝基咪唑類藥物
- 測驗方法：競爭ELISA方法
檢測原理,檢測範圍,
檢測原理
本試劑盒是利用競爭ELISA方法，在酶標板微孔上預包被抗 硝基咪唑抗原。檢測時，加入標準品或樣品溶液，硝基咪唑抗體及酶標記物，包被抗原和加入樣本中的硝基咪唑競爭性地與硝基咪唑抗體結合後，再與酶標記物形成抗原抗體複合物，用TMB底物顯色；加入反應終止液，在450nm波長酶標儀下進行檢測，樣品中的硝基咪唑濃度與吸收光強度成反比。
檢測範圍
本試劑盒是套用ELISA技術研發的藥物殘留檢測產品,與儀器分析技術比較，能經濟、快速地檢測出蜂蜜中的硝基咪唑類藥物。
三、交叉反應率
與類似物的交叉反應率：
甲硝唑(MNZ) 100%
二甲硝咪唑DMZ 168%
洛硝唑(RNZ) 112%
異丙硝唑 33%
試劑盒靈敏度、準確度、精密度
試劑盒靈敏度：0.05ppb
樣本最低檢測限：
蜂蜜 0.1ppb
回收率：
蜂蜜樣本 90±10%
精密度：
試劑盒的變異係數均小於10%
圖片僅供參考，產品以實物為準。
甲硝唑檢測試劑盒說明書
硝基咪唑類酶聯免疫檢測試劑盒
使用說明書
一、檢測原理
本試劑盒是利用競爭ELISA方法，在酶標板微孔上預包被抗 硝基咪唑抗原。檢測時，加入標準品或樣品溶液，硝基咪唑抗體及酶標記物，包被抗原和加入樣本中的硝基咪唑競爭性地與硝基咪唑抗體結合後，再與酶標記物形成抗原抗體複合物，用TMB底物顯色；加入反應終止液，在450nm波長酶標儀下進行檢測，樣品中的硝基咪唑濃度與吸收光強度成反比。
二、檢測範圍
本試劑盒是套用ELISA技術研發的藥物殘留檢測產品,與儀器分析技術比較，能經濟、快速地檢測出蜂蜜中的硝基咪唑類藥物。
三、交叉反應率
與類似物的交叉反應率：
甲硝唑(MNZ) ………………………………………100%
二甲硝咪唑DMZ…………………………………… 168%
洛硝唑(RNZ) ………………………………………112%
異丙硝唑……………………………………………33%
四、試劑盒組成
酶標板1塊，96孔/板
標準液6瓶（1ml/瓶）：
0 ppb、0.05ppb、0.2ppb、0.8ppb、3.2ppb、12.8ppb
抗體工作液 ………………………7ml
酶標記物 ……………………… 12ml
底物液A …………………………7ml
底物液B …………………………7ml
終止液 …………………………7ml
20X濃縮洗滌液 ………………40 ml
2X濃縮復溶液 ………………50 ml
說明書 ……………………………1份
五、 需要但試劑盒中不提供的器材和試劑
（1）設備
……微孔板酶標儀(450nm)
……振盪器、離心機
……微量移液器：20μl～200μl,100μl~1000μl
……容量瓶：100ml，500ml，1000ml
（2）試劑
……NaOH、無水碳酸鈉、碳酸氫鈉、正己烷
六、溶液的配製
樣本前處理需配製：
配液1：pH7.2 0.1M 碳酸鹽緩衝液
稱取4.66g無水碳酸鈉，0.5g碳酸氫鈉
去離子水500ml溶解。
配液2：2M 氫氧化鈉溶液
稱取40g氫氧化鈉，加入去離子水500ml溶解。
配液3：復溶液1×
2×復溶液在使用前請按1：1稀釋
（1份濃縮復溶液+1份去離子水）
配液4：洗滌液
將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用蒸餾水稀釋
（1份濃縮洗滌液+1份去離子水）
（可按需配置）
七、樣本前處理方法
樣本處理前須知
處理任何樣本時，都須注意：
（1）實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
（2）實驗之前須檢查各種實驗器具是否乾淨，必須使用潔淨實驗器具，以避免污染干擾實驗結果。
樣本處理步驟：
(A)蜂蜜（樣本稀釋倍數0.5）
（1）取3g蜂蜜，加3ml 0.1M 碳酸鹽緩衝溶液振盪至蜂蜜全部溶解；
（2）加入9ml 乙酸乙酯，振盪5分鐘，室溫4000轉/分，離心5分鐘；
（3）取上層有機相6ml至另一離心管中，加入2ml乙酸乙酯，2ml 2M氫氧化鈉溶液，振盪5分鐘，室溫4000轉/分，離心5分鐘；
（4）取4ml清澈上層有機相至乾淨玻璃試管中，56℃水浴氮氣/空氣吹乾；
（5）加入正己烷1ml，渦動30s，再加入0.5ml復溶工作液混合30秒，室溫4000轉/分以上，離心5分鐘；
（6）去除上層有機相，取下層50µl液體用於分析。
八、酶聯免疫檢測步驟 測定前須知：
1、使用之前將所有試劑和需用微孔板回升至室溫。
2、使用之後立即將所有試劑放回2-8℃。
3、在使用中不要讓微孔乾燥。
4、在ELISA分析中的重複性，很大程度上取決於洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程式中的要點。
5、在所有恆溫孵育過程中，避免光線照射，用該板膜蓋住微孔板。
測定步驟：
1、將所需試劑從冷藏環境中取出，抗體不用在室溫下平衡，每種液體使用前均須搖勻。注意標準液均需做2個平行試驗。
2、加標準品/樣本50µl /孔，再加入抗體工作液50µl/孔。輕輕振盪混勻，用蓋板膜蓋板，4℃環境反應1小時。
3、小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩乾，加洗滌液 250ml/孔，每次浸泡15~30秒，充分洗滌4－5次，用吸水紙拍乾。
4、加酶標記物每孔100μl，用蓋板膜蓋好，25℃下避光反應30分鐘。取出酶標板，重複步驟3；
5、每孔先各加入底物液A 50μl，再各加入底物液B 50μl，輕
輕晃蕩混勻，並在25℃下避光反應30分鐘。
6、每孔各加50μl終止液，在酶標儀於450nm處測定OD值（建議用450/630nm雙波長檢測，在5分鐘內讀完數據）。
九、結果分析
所測得的標準液或樣品吸光度的平均值（B）除以第一個標準液（0標準液）的吸光度（B0）值再乘以100%，得到百分吸光度值。
百分吸光度值（%）=B/B0 ×100%
以標準品濃度的10為底的對數為X軸， 百分吸光值為Y軸，繪製標準曲線。將樣本的百分吸光值代入標準曲線，從標準曲線上讀出樣本所對應的值，作為10的冪，乘以稀釋倍數，即為樣品中所含硝基咪唑類藥物的量。
利用試劑盒專業分析軟體進行計算，更便於大量樣品的準確、快速分析。
十、試劑盒靈敏度、準確度、精密度
試劑盒靈敏度：0.05ppb
樣本最低檢測限：
蜂蜜樣本…………………………………………0.1ppb
回收率：
粵爾LOGO
粵爾LOGO蜂蜜樣本 …………………………………………90±10%
精密度：
試劑盒的變異係數均小於10%
十一、注意事項
1、室溫低於20℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20-25℃）
會導致所有標準的OD值偏低。
2、在洗板過程中如果出現板孔乾燥的情況，則會出現標準
曲線不成線性，重複性不好的現象。所以洗板拍乾後應
立即進行下一步操作。
3、反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。如不慎滴漏到皮膚上，請儘快用水沖洗。
4、不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
5、保存試劑盒於2-8℃，不要冷凍，將不用的微孔板放進自封袋重新密封。標準物質和無色的發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
6、顯色試劑有任何顏色表明發色劑變質，應當棄之。0標準的吸光度（450nm）值小於0.5（A450nm<0.5 ）時，表示試劑可能變質。
7、在加入底物液後，一般顯色15分鐘即可。若顏色較淺，可延長反應時間到20分鐘（或更長），但不得超過30分鐘。反之，則減短反應時間。
十二、貯藏條件及保存期
貯藏條件：在2～8℃保存試劑盒
保存期：本試劑盒有效期為12個月。
