破骨細胞空泡ATP酶V0結構域e1亞單位的轉錄調控機制研究

《破骨細胞空泡ATP酶V0結構域e1亞單位的轉錄調控機制研究》是依託上海交通大學，由應華擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：破骨細胞空泡ATP酶V0結構域e1亞單位的轉錄調控機制研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：應華
• 依託單位：上海交通大學

項目摘要

骨骼是由成骨細胞、破骨細胞及骨細胞共同精確調控的，處於動態平衡的器官。若平衡被打破，則可表現為骨質疏鬆、骨硬化等疾病。破骨細胞數量增多或活性增強是導致骨質疏鬆的直接原因。空泡ATP酶作為破骨細胞唯一的泌酸機制，對破骨細胞骨吸收起關鍵作用。近年來，申請者針對破骨細胞空泡ATP酶V0結構域e1亞單位，構建了破骨細胞特異的e1亞單位基因敲除小鼠，通過系統研究基因敲除小鼠的骨骼表型、破骨細胞功能，揭示了e1亞單位在破骨細胞空泡ATP酶介導的骨吸收過程中的生物學功能。然而，作為破骨細胞空泡ATP酶重要亞單位之一，其轉錄調控機制有待發掘。前期試驗中，申請者證實e1亞單位在破骨細胞分化過程中表達大幅上調。在此基礎上，本研究將採用藥物抑制、逆轉錄病毒轉染、螢光素酶篩選、計算機模擬預測、構建點突變質粒等分子生物學手段，旨在闡明破骨細胞分化過程中e1亞單位轉錄調控機制，以期為溶骨性疾病的治療開拓新思路。

結題摘要

骨骼是由成骨細胞、破骨細胞及骨細胞共同精確調控的，處於動態平衡的器官。若平衡被打破，則可表現為骨質疏鬆、骨硬化等疾病。破骨細胞數量增多或活性增強是導致骨質疏鬆的直接原因。空泡ATP酶作為破骨細胞唯一的泌酸機制，對破骨細胞骨吸收起關鍵作用。作為破骨細胞空泡ATP酶重要亞單位之一，v0結構域e1亞單位的表達調控機制有待發掘。通過本項目的研究，我們利用藥物抑制、基因沉默、PCR、免疫電泳、免疫共沉澱、體外細胞測試、免疫螢光-共聚焦顯像、微型CT等手段，證明巨噬細胞遷移抑制因子與cAMP 反應原件結合蛋白共同調控破骨細胞的分化，為溶骨性疾病的治療開拓新思路。同時我們還通過共聚焦顯微鏡記錄破骨細胞在不同環境中形態變化，結合RNA測序，推導極化狀態、多核分布對細胞功能的可能影響，為進一步理解破骨細胞生理功能進行了有益的探索。