相稱顯微鏡是一種增加對比度的方法。可以在不染色的情況下看到活體細胞。
基本介紹
- 中文名：顯微鏡
相稱顯微鏡，又叫相差顯微鏡（Phase contrast microscopy）。相差是一種增加對比度的方法，可以在不染色的情況下看到活體細胞。
相稱顯微鏡是一種利用光的衍射和干涉現象將透過標本的光線光程差或相位差轉換成肉眼可分辨的振幅差顯微鏡。提高了密度不同物質圖像的明暗區別，可用於觀察未經染色的細胞結構。
位相差顯微鏡的原理為何？如何調整？
相差成像
人的眼睛能夠識別明與暗之差（光的強度）和顏色不同（光的波長不同），但難以識別差別小的無色的透明物體。
光對無色透明物體（相位物體）並不引起明、暗和顏色的變化，而只產生所謂的相位差。可是這種相位差不能用肉眼識別，也就看不見這種相位物體了。
相差顯微鏡利用阿貝成像原理，把相位變化轉化為振幅變化，是觀察透明物體的關鍵。
光路原理
相差光路比普通光學顯微鏡多了兩個元件：環形光闌（annular diaphragm）和相位板 （annular phaseplate ）
環形光闌：位於光源和聚光器之間。不同的環狀孔形成的光闌，它們的直徑和孔寬是與不同的物鏡相匹配的。由於透明圓環所成的像恰好落在物鏡後焦點平面和相板上的共軛面重合。因此，未發生偏斜的直射光便通過共軛面。其作用是將直射光所形成的像從一些衍射旁像中分出來。
相位板：安裝在物鏡的後焦面處，相板裝有吸收光線的吸收膜和推遲相位的相位膜。它除能推遲直射光線或衍射光的相位以外，還有吸收光使亮度發生變化的作用。
人的眼睛能夠識別明與暗之差（光的強度）和顏色不同（光的波長不同），但難以識別差別小的無色的透明物體。
光對無色透明物體（相位物體）並不引起明、暗和顏色的變化，而只產生所謂的相位差。可是這種相位差不能用肉眼識別，也就看不見這種相位物體了。
相差顯微鏡利用阿貝成像原理，把相位變化轉化為振幅變化，是觀察透明物體的關鍵。
光路原理
相差光路比普通光學顯微鏡多了兩個元件：環形光闌（annular diaphragm）和相位板 （annular phaseplate ）
環形光闌：位於光源和聚光器之間。不同的環狀孔形成的光闌，它們的直徑和孔寬是與不同的物鏡相匹配的。由於透明圓環所成的像恰好落在物鏡後焦點平面和相板上的共軛面重合。因此，未發生偏斜的直射光便通過共軛面。其作用是將直射光所形成的像從一些衍射旁像中分出來。
相位板：安裝在物鏡的後焦面處，相板裝有吸收光線的吸收膜和推遲相位的相位膜。它除能推遲直射光線或衍射光的相位以外，還有吸收光使亮度發生變化的作用。
利用位相差聚光鏡及內部位相環所構成的環狀光圈，產生中空光錐通過聚光鏡、穿過檢體，經過物鏡內的光延遲位環板而成，因檢體折射指數不同，造成繞射光束與直射光束髮生干涉作用，得到明暗對比的效果。調整位相差裝置，先選擇聚光鏡上與物鏡相同倍率之位相差環，所形成的亮環與物鏡內的暗環配合，調整聚光鏡上亮環，使之重疊即可。
位相稱顯微鏡套用
主要提供胚胎形態的觀察、胚胎級數的判別等特殊功用。解剖顯微鏡，提供睪丸取精之後，切取組織搜尋精子或采卵時搜尋卵子，因此臨床套用於：
●觀察卵子及胚胎的發育情形。
●輔助胚胎植入前診斷之細胞核固定。
●精蟲顯微注射之套用操作。
●胚胎輔助孵化之套用操作。
相稱顯微鏡的優勢：
我們一般用普通顯微鏡觀察試樣的顯微鏡組織，是靠試樣表面反射光的強弱（即黑白灰度的不同）來鑑別它。
有的顯微鏡組織由於其反射率和吸收率的不同而產生不同的灰度。反射率較大者，則組織較明亮：反射率較小者，組織比較灰暗。
當試樣上兩相的反射係數相同，僅有因輕微侵蝕或各相硬度不同而使拋光時形成微小凹凸，或者有塑膠性變形及第二類共格差別。
對此一般生物顯微鏡明場就不易鑑別，當表面高低起伏極小時，更難辨別，而相稱技術成功地解決了這一問題。一般表面高低差在100～1500Ao(1Ao=0.1NM)範圍內均能用相稱顯微鏡來觀察。
●觀察卵子及胚胎的發育情形。
●輔助胚胎植入前診斷之細胞核固定。
●精蟲顯微注射之套用操作。
●胚胎輔助孵化之套用操作。
相稱顯微鏡的優勢：
我們一般用普通顯微鏡觀察試樣的顯微鏡組織，是靠試樣表面反射光的強弱（即黑白灰度的不同）來鑑別它。
有的顯微鏡組織由於其反射率和吸收率的不同而產生不同的灰度。反射率較大者，則組織較明亮：反射率較小者，組織比較灰暗。
當試樣上兩相的反射係數相同，僅有因輕微侵蝕或各相硬度不同而使拋光時形成微小凹凸，或者有塑膠性變形及第二類共格差別。
對此一般生物顯微鏡明場就不易鑑別，當表面高低起伏極小時，更難辨別，而相稱技術成功地解決了這一問題。一般表面高低差在100～1500Ao(1Ao=0.1NM)範圍內均能用相稱顯微鏡來觀察。
