白癜風黑素細胞凋亡小體形成及其抗原呈遞機制的研究

《白癜風黑素細胞凋亡小體形成及其抗原呈遞機制的研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由李強擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：白癜風黑素細胞凋亡小體形成及其抗原呈遞機制的研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：李強
• 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學

中文摘要

白癜風發病與自身免疫密切相關。研究證明，黑素細胞抗氧化功能缺陷、高氧化應激誘導細胞凋亡進而啟動抗原特異性免疫應答，是發病過程中的重要環節。但凋亡後自身抗原如何暴露的分子機制尚不清楚。我們前期發現：核纖層蛋白Lamin A是一種新的白癜風抗原，在氧化應激誘導的黑素細胞凋亡早期，與酪氨酸酶等抗原共同形成凋亡小體（AB），而AB是自身免疫疾病T、B細胞抗原產生的重要來源，這為抗原暴露的研究提供重要線索。因此本項目擬運用電鏡、免疫印跡等手段，以白癜風黑素細胞AB為主要研究對象，檢測分析在氧化應激誘導凋亡早期、晚期，啟動凋亡、形成AB的信號通路，AB蛋白組成及抗原再定位機制，胞內、外危險信號的促吞噬功能，在動物水平驗證AB免疫應答的特異性，深入闡釋AB形成、免疫識別及吞噬的一系列分子事件。最終闡明AB介導的免疫呈遞機制。結果有望揭示白癜風細胞凋亡與免疫應答間的內在聯繫，進一步完善白癜風的發病機制。

結題摘要

本項目取得以下幾個方面重要成果： 1. 分離純化ABs，進行電鏡形態學鑑定，進一步流式鑑定表面PS表達明確90%以上被檢顆粒為 Annexin V 陽性，提示我們成功分離純化了Abs；2. 選取已經明確的白癜風相關抗原蛋白抗體TYR，TYRP-1，TYRP-2及我們課題組前期發現的Lamin A 及Lamin A（ASP230）等進行ABs總蛋白的Western Blot實驗，明確了Lamin A（ASP230），TYRP-1在凋亡過程中可再定位於Abs； 3. 進一步研究明確胞質及核內自身免疫性相關抗原蛋白也可在凋亡過程中再定位於Abs， 蛋白質組學證實了Western Blot結果。免疫電鏡的方法觀察到了陽性抗原與ABs存在共定位；4. 對黑素細胞進行不同強度及不同時間的氧化應激刺激，Western Blot發現ABs中陽性抗原蛋白與氧化應激刺激強度及時間呈正相關，進一步流式細胞術檢測ABs形成情況，發現ABs形成與氧化應激刺激強度和時間呈正相關； 5. 利用JNK抑制劑SP600125、caspase抑制劑Z-VAD、骨架蛋白激活激酶抑制劑Y-27632及ML-9預處理細胞後誘導凋亡，分離純化ABs，Western Blot檢測發現抑制相關信號通路可以抑制陽性抗原再定位於ABs，流式檢測ABs的形成，發現抑制相關信號通路可以抑制ABs的形成，以上結果提示：JNK、caspase、骨架蛋白激活相關信號通路參與抗原再定位及ABs形成。綜上所述，本研究首次明確了在氧化應激誘導黑素細胞凋亡後自身抗原變形凝集於ABs，胞內抗原暴露，為特異性CTL 克隆及活化自反應性B細胞提供了可能的抗原來源，為氧化應激啟動自身免疫反應的機制提供了新證據，對於進一步豐富和完善白癜風的發病機制提供了重要的理論依據。