基本介紹
- 中文名：異氯黴素
- 外文名：meta-nitrochloramphenicol
- 套用：氣相色譜(GC)檢測氯黴素殘留
異氯黴素,氯黴素,異氯黴素的合成,α-溴代間-硝基苯乙酮(A),α-溴代苯乙酮六次甲基四銨鹽(B),間硝基-α-氨基苯乙酮(C),α-二氯乙醯氨基-間-硝基苯乙酮(D),二氯乙醯氨基-羥基-間硝基苯丙酮(E),間硝基苯基-二氯乙醯胺基-丙二醇(F),異氯黴素的純化,重結晶,淨化與分離,純化,
異氯黴素
異氯黴素(meta-nitrochloramphenicol，m-CAP)是氯黴素的同分異構體，是氣相色譜(GC)檢測氯黴素殘留的一種內標物，用它作內標物是氯黴素痕量分析中提高定量準確性的一種有效方法。用它來作為氯黴素的氣相色譜定量與氣相色譜/質譜(GC--MS)聯用確證檢測方法的內標物。
氯黴素
氯黴素(chloramphenicol，CAP)是由委內瑞拉鏈黴菌產生的-種廣譜抗生素，1947年由Ehrich等首次從鏈黴菌中分離得到，其化學名為D-蘇阿型-1-對硝基苯基-2-二氯乙醯胺基-1，3-丙二醇。氯黴素也是第-種採用化學合成法產生的抗生素。自1948年上市以來-直是治療傷寒、副傷寒和沙門氏菌的首選藥，氯黴素對G+、G-、支原體、衣原體、立克次氏體均有抑制作用，廣泛用於動物各種細菌性疾病的治療，被人醫臨床和獸醫臨床用於治療葡萄球菌感染。在獸醫臨床用於治療革蘭氏陰性菌引起的多種疾病。
但是氯黴素有嚴重的毒副作用，其主要毒副作用是抑制造血機能，能導致再生障礙性貧血(粒細胞或全血細胞)和其他惡性血液病，且其發生與使用頻率和使用劑量無關。人體對氯黴素較動物更敏感，嬰幼兒的代謝和排泄機能尚不完善，對氯黴素最敏感，可出現致命的灰嬰綜合症。已有1例兒童服用2mg和老年婦女服用約82mg後死亡的報導。氯黴素在組織中的殘留濃度能達到1mg.kg-1以上，對食用者身體健康威脅很大。氯黴素的上述毒性使其成為第-個被禁止用於食品動物的抗生素，因此世界上許多國家限制甚至禁止此藥用於食品動物。歐盟及美國都要求在動物性食品中不得檢出。
異氯黴素的合成
合成路線可分六步進行。(l)a碳原子氫的嗅代；(2)與六次甲基四胺形成季銨鹽；(3)在乙醇濃鹽酸中水解成伯胺；(4)胺被二氯乙醯氯醯化；(5)與甲醛反應生成β-羥基酮；(6)還原酮基。
α-溴代間-硝基苯乙酮(A)
取10.0g(60mmol)間-硝基苯乙酮於三口燒杯中，加入40.0ml氯苯溶解；取3.1ml(9.68g，60mmol)液溴，加入到盛有20ml氯苯的分液漏斗中，搖勻，在攪拌下緩慢滴加至三口燒瓶中。用200W白熾燈照射，反應發生後撤去白熾燈。添加完畢後，攪拌1h，連續用40.0ml的水、碳酸鈉水溶液、飽和氯化鈉水洗滌。用無水硫酸鈉乾燥，蒸乾溶劑得到14.0g粗產品，產率94.6%。用95%乙醇重結晶得到12.3g(53%)。熔點89-91℃。
α-溴代苯乙酮六次甲基四銨鹽(B)
取9.5g(68mmol)六次甲基四胺粉末溶於57.0ml氯苯中，在室溫攪拌幾分鐘後將溶有15.0g(61mmol)A的5.70ml氯苯加入到燒瓶中，邊加邊攪拌。在室溫下攪拌反應2小時，抽濾。濾渣用400.0ml乙醇洗滌過濾，再用100.0ml乙醇洗滌，重複幾次，真空乾燥，得到22.1g固體，產率94%。
間硝基-α-氨基苯乙酮(C)
稱取25.0g(65mmol)B加入90.0ml95%乙醇，44.0ml的濃鹽酸於三口燒瓶中(裝有攪拌器，溫度計)。混合物在室溫下攪拌16小時。冷卻到5℃過濾。晶狀產物由鹽酸胺和氯化按組成，加入50.0ml水(25℃)攪拌15分鐘，冷卻到10℃抽濾。產品在乾燥器中乾燥，得9.9g固體，產率70%。
α-二氯乙醯氨基-間-硝基苯乙酮(D)
取5.0g(23mmol)C於150.0ml燒瓶中，加入50.0ml苯，3，7g(25mmol)二氯乙醯氯，加熱回流24h，熱過濾。濾液冷卻，蒸乾苯得到5.0g乙醯化產品，產率74%，熔點105-107℃。
二氯乙醯氨基-羥基-間硝基苯丙酮(E)
取乙醯化產物D5.0g(17mmol)於燒瓶中，加入26.0ml無水乙醇，5.4ml(70mmol)37%的甲醛溶液，攪拌5min後加入1.0g碳酸氫鈉，30-35℃水浴，至所有固體溶解。混合物加入冰水混合物中，攪拌至所有固體析出，加水稀釋後冷卻到5℃，收集沉澱，用乙醇，水做重結晶，得到3.3g固體，產率60%，熔點132-135℃。
間硝基苯基-二氯乙醯胺基-丙二醇(F)
2.0gE溶於40.0ml甲醇和2.0ml三氯甲烷的混合溶液中，30℃時加入硼氫化鈉0.3g，劇烈反應後冷卻溶液，加入20.0ml水稀釋，60℃水浴20min，蒸乾甲醇，水溶液層用4.0ml乙酸乙酯洗滌2次，結合有機層，用飽和氯化鈉水洗滌，無水MgSO4乾燥，得到m-CAP1.9g，產率95%，熔點122-125℃。
異氯黴素的純化
重結晶
1.0g m-CAP溶於1.0ml熱無水乙醇中，加入10.0ml水放置過夜，過濾，得到針狀m-CAP固體。
淨化與分離
選用三氯甲烷:甲醇(V/V，80:20)的混合液作洗提液，將之前得到的樣品溶解在適量甲醇中，倒入矽膠柱內，當液面與矽膠頂部相近時，加入洗提液。m-CAP隨洗提液向矽膠柱的下部移動。繼續加足夠量的洗提液，使m-CAP全部從柱子裡洗提下來。用已標號的試管收集洗提液。分別在薄層板上點樣，用三氯甲烷:甲醇(V/V，80:20)的展開劑展開後，在紫外分析儀下分析，將含有m-CAP的洗提液收集在一起，蒸乾溶劑，得m-CAP固體純品。
純化
將m-CAP溶解在適量甲醇中，點樣於用於樣品分離的薄層板上，用三氯甲烷:甲醇(V/V，80:20)的展開劑展開。在紫外分析儀下分析，將Rf值是0.63斑紋處的矽膠刮下，置於燒杯中，用適量的甲醇洗滌，過濾。濾液蒸乾後可得純化較好的m-CAP，測得熔點122-125℃。
