環狀單鏈雜交法: 先建立一個定向克隆於噬菌體cDNA 的文庫，用超感染法使之釋放單鏈環狀質粒，單鏈純化後在過量3' 引物的ddNTP 作用下進行廣泛且限制性的延伸，合成長約200bp 的互補片段。分離這些片段，使之在較低的Cot 值下進行變性和復性，未復性部分的單鏈可直接轉化細菌，使文庫在構建過程中省去了亞克隆的步驟，也保證了文庫中的cDNA 的長度。由於復性發生在3' 端的200bp,避免基因家族之間的交叉雜交，保證CDNA的代表性。
基本介紹
- 中文名：環狀單鏈雜交法
- 類型：生物學術語
構建標準化CDNA 文庫(normalized cDNA library) 即構建在某一特定組織或細胞中
表達的每個基因均含有等量CDNA 的文庫，故又稱為等量化CDNA 文庫(equalized cDNA library)。這種文庫主要優點是:
1增加了克隆極低豐度mRNA,尤其是那些經過消減和選擇雜交仍難以克隆的轉錄本;
2 等量化的CDNA 可作探針來發現基因組順序中的轉錄區，尤其是普通CDNA 探針所不能發現的稀有轉錄區
3 與原始豐度的mRNA 拷貝數相對應的CDNA探針與標準化的CDNA 文庫作雜交，可估計出大多數基因的表達水平及發現一些組織表達特異性基因。
