火箭免疫電泳（rocket immunoelectrophoresis，RIEP）是將單向免疫擴散和電泳相結合的一種定量檢測技術。
電泳時，含於瓊脂凝膠中的抗體不發生移動，而在電場的作用下促使樣品中的抗原向正極泳動。當抗原與抗體分子達到適當比例時，形成一個形狀如火箭的不溶性免疫複合物沉澱峰，峰的高度與撿樣中的抗原濃度呈正相關。因此，當瓊脂中抗體濃度固定時，以不同稀釋度標準抗原泳動後形成的沉澱峰為縱坐標，抗原濃度為橫坐標，繪製標準曲線。根據樣品的沉澱峰長度即可計算出待測抗原的含量；反之，當瓊脂中抗原濃度固定時，便可測定待測抗體的含量（即反向火箭免疫電泳）。
基本介紹
- 中文名：火箭免疫電泳
- 外文名：rocket immunoelectrophoresis
- 簡稱：RIEP
- 類屬：定量檢測技術
- 材料：巴比妥鈉、巴比妥等
- 操作：抗原、抗體濃度的選擇等
簡介,實驗原理,實驗材料,操作步驟,
簡介
火箭免疫電泳（rocket immunoelectrophoresis，RIEP）是將單向免疫擴散和電泳相結合的一種定量檢測技術。
實驗原理
電泳時，含於瓊脂凝膠中的抗體不發生移動，而在電場的作用下促使樣品中的抗原向正極泳動。當抗原與抗體分子達到適當比例時，形成一個形狀如火箭的不溶性免疫複合物沉澱峰，峰的高度與撿樣中的抗原濃度呈正相關。因此，當瓊脂中抗體濃度固定時，以不同稀釋度標準抗原泳動後形成的沉澱峰為縱坐標，抗原濃度為橫坐標，繪製標準曲線。根據樣品的沉澱峰長度即可計算出待測抗原的含量；反之，當瓊脂中抗原濃度固定時，便可測定待測抗體的含量（即反向火箭免疫電泳）。
實驗材料
（一）材料和試劑
1、PH8.6，0.1M巴比妥--巴比妥鈉緩衝液
巴比妥鈉 10.3 g
巴比妥 1.84 g
硫柳汞 100 mg（防腐劑）
蒸餾水加熱溶解並定容至500ml
2、1%預復瓊脂（或瓊脂糖）
1g瓊脂（或瓊脂糖）加蒸餾水100ml溶化即可。
3、1.5%瓊脂糖凝膠
1.5g瓊脂糖加50ml蒸餾水置水溶中煮沸溶解或用與波爐加熱溶解（注意不要溢出且注意加入蒸發的水），然後再加入50ml上述巴比妥緩衝液混勻，置4℃保存備用。
4、抗原及相應免疫血清。
（二）設備和器材
玻璃板、模具，打孔器和挑針、滴管、有蓋搪瓷盒（內鋪有濕潤的濾紙）、溫箱（25℃）、三角燒杯、玻璃攪拌、微量加樣器、其他常用器材。
操作步驟
1、抗原、抗體濃度的選擇
以分別固定抗原含量與抗體濃度的方法，選取最小抗原量與最低抗體濃度，在免疫電泳後能出現最清晰項端狹窄且尖的錐形沉澱峰，長達2～5cm者為標準。一般抗原用量為0.5～5微克，抗血清用量為5～10微升，稀釋度於1：10～1：200之間進行選擇。
2、預復瓊脂玻板的製備
將溶化的1%預復瓊脂用滴管加玻板上，使之能將表面覆蓋即可，放於溫箱內乾燥（或自然乾燥），即可用以製備凝膠板。
3、抗血清瓊脂板製備
根據上述選擇結果，取一定量抗血清與一定量融化並冷卻至56℃的1.5%巴比妥緩衝瓊脂混合，使抗血清的濃度為以上述方法選擇出的最適濃度，澆制抗血清瓊脂板。瓊脂厚度為1～2mm，玻板大小可根據實驗所需而確定。如用5×7.5cm大小玻板時，約需抗血清瓊脂6ml.
4、打孔、加樣
待瓊脂凝固後，於距玻板一長邊10mm處，以3mm孔徑打孔器打孔一排，孔距5mm.於各孔中加入抗原液，每孔10微升。每次實驗中應加入幾個不同濃度的標準抗原以作對照。稀釋範圍包括標本含量的最高與最低水平。
5、電泳
將瓊脂板置於電泳槽橫樑上，加樣端位於負極，以雙層濾紙聯接瓊脂板與電泳槽內緩衝液（槽內緩衝液為0.06M pH8.6巴比妥緩衝液）。接通電源，板端電壓3v/cm，電流強度3mA/cm，電泳5小時。
6、結果判定（電泳結果示意圖點擊展開）
電泳畢，取出瓊脂板，依次用生理鹽水、蒸餾水浸泡後，加1%鞣酸沖洗瓊脂板，晾乾，即可觀察與測定結果。也可以常規蛋白質染色法染色後觀測結果。測定結果的方法有兩種：一是測量沉澱峰的高度（自孔中央至峰尖），以mm計；另一是以求積儀測量沉澱峰的面積，以mm2計。前者較簡便，後者較準確。根據測定的結果，從標準曲線中計算出待檢標本中的抗原含量。
7、標準曲線制定
用上述選擇好的最適濃度抗血清製備瓊脂板。打孔，加入合適比例的5～10個標準抗原濃度，反覆試驗10次，取每次電泳後所測定的沉澱峰高度（或面積）的平均值，繪出標準曲線。
