濕電轉膜儀是用來轉印蛋白的儀器。轉移蛋白最常用的是電泳轉印方法,該技術具有快速、有效、並保持蛋白在凝膠中高解析度的特性。電泳轉印法是指在凝膠中分離的蛋白質向印跡膜載體轉印的過程。由於該技術可以準確、快速、高效的將蛋白轉印到膜上,並可以保持蛋白在凝膠中高的解析度,而被廣泛的套用於轉移印跡技術中。
基本介紹
- 中文名:濕電轉膜儀
- 用途:轉印蛋白的儀器
- 方法:電泳轉印
- 特性:保持蛋白在凝膠中高解析度
濕電轉膜儀操作步驟:
(1) 轉一張膜需準備2張6.5*10cm的濾紙和1張5.5*8.5cm的PVDF膜。切濾紙和膜時一定要戴手套,因為手上的蛋白會污染膜。將切好的PVDF膜浸於甲醇中不少於15s才可使用。
(2) 在加有轉移液的搪瓷盤裡放入轉膜用的夾子、兩塊海綿墊、兩張濾紙和浸過的PVDF膜。
(3) 打開夾子將黑的一面放入轉膜液中,從下往上依次放入海綿、濾紙、分離膠、PVDF膜、濾紙、海綿。
注意:1 整個過程在轉膜液中進行在鋪每一層時要用刮子趕氣泡,尤其是膠與膜之間一定不能留有氣泡。
2 撬玻璃板剝膠時動作要輕,用刮子將濃縮膠輕輕颳去小心剝下分離膠蓋於濾紙上,用手調整使其與濾紙對齊
(4) 將夾子合好,放到轉移槽槽中,要使夾的黑面對槽的黑面,夾的白面對槽的紅面。接通電電轉移時會產熱,在槽的一邊有較大空隙,放入事先準備好的冰盒來降溫。將整個電泳槽放入一個大的容器中(大的塑膠泡沫盒子最好),在這個容器中盛滿冰。