《減重術後膽汁酸對L細胞的影響及機制研究》是依託中南大學，由李鵬洲擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：減重術後膽汁酸對L細胞的影響及機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：李鵬洲
- 依託單位：中南大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
減重手術後L細胞分泌的激素水平顯著升高被認為是術後糖尿病改善的主要原因。膽汁酸作為一種內源性信號分子，在細胞的增殖、分化、細胞內信號轉導中扮演了重要的角色。我們前期研究發現減重手術之後2型糖尿病患者的膽汁酸和L細胞分泌水平顯著升高，兩者成正相關，啟示測膽汁酸對L細胞分泌功能在減重手術後的改善起到重要作用。本研究以減重手術動物模型和體外L細胞為研究對象，觀察膽汁酸對L細胞內脂代謝、細胞凋亡及分泌水平的影響，並探討膽汁酸受體FXR在其中的作用，同時研究SREBP-1C表達水平的變化，本研究以膽汁酸與L細胞分泌激素水平為切入點，探討L細胞在減重手術後分泌功能改善的機制，為2型糖尿病的防治提供新靶點和理論基礎。
結題摘要
近年來有研究發現，2型糖尿病的肥胖症病人實施減重手術後糖尿病症狀能得到顯著緩解，可能與膽汁酸和L細胞分泌功能的改善有關。針對這一臨床現象，我們以減重手術動物模型和腸內分泌L細胞為研究對象，對手術後II型糖尿病緩解的作用機制展開了研究。其主要研究內容與結果如下： 1、成功建立了肥胖糖尿病大鼠手術模型，其中實施減重手術組的大鼠血清中膽汁酸和GLP-1的含量均顯著高於對照組，表明膽汁酸與GLP-1的分泌可能與術後II型糖尿病緩解有關。 2、利用GW4064、si-FXR干擾片段、FXR過表達質粒轉染腸內分泌L細胞，評價了FXR對GLP-1分泌的影響。結果顯示，GW4064處理能顯著提高GLP-1的分泌，而FXR的過表達能降低GLP-1的分泌，表明FXR可抑制GLP-1的分泌。 3、通過BioGRID資料庫與KEGG京都大學通路分析，篩選參與糖原信號通路的FXR互作蛋白，而後對比得到對GLP – 1分泌影響最顯著的互作蛋白CREB。 4、驗證FXR與CREB蛋白存在相互作用。GST pull-down結果顯示，FXR-GST實驗組中能檢測出CREB-His蛋白，而GST實驗組中不能檢測出CREB-His蛋白；Co-IP結果顯示，單獨轉染Myc-CREB不能被Flag抗體沉澱下來，而共轉染myc-CREB與flag-FXR，Myc-CREB可被Flag抗體沉澱下來，表明FXR與CREB蛋白存在相互作用。 5、通過螢光素酶報告基因法、FXR表達干擾或過表達處理、cAMP-CREB通路激活處理探討了FXR、CREB、GLP-1三者之間的關係。結果顯示，CREB蛋白能與CRE基因結合從而促進其轉錄，導致螢光蛋白酶被轉錄翻譯；FXR過表達與Forskolin處理不影響CREB的表達，但影響其下游基因PCSK1表達；當FXR過表達時，PCSK1 表達與GLP-1分泌受到抑制，而加入Forskolin處理後，PCSK1表達與GLP-1分泌升高。上述結果表明，FXR能與CREB蛋白結合形成複合物，解離共激活因子，從而抑制CREB對下游基因PCSK1的表達，進而抑制GLP-1的分泌。 本課題著重研究了膽汁酸受體FXR在調控腸內分泌L細胞分泌的分子作用機制，可為2型糖尿病的防治提供一定的理論指導作用。
