《活性維生素D調控卵巢癌MLH1基因的表觀遺傳學機制研究》是依託華中科技大學，由於利利擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：活性維生素D調控卵巢癌MLH1基因的表觀遺傳學機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：於利利
- 依託單位：華中科技大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
卵巢癌是病死率最高和五年生存率最低的婦科惡性腫瘤。MLH1是DNA錯配修復系統的重要成員，我們前期研究發現在卵巢癌中存在MLH1啟動子甲基化，其蛋白表達下降，與卵巢癌的發生與耐藥有重要關係，但是其表觀遺傳學調控機制不明。活性維生素1,25(OH)2D3能通過去除組蛋白甲基化及DNA甲基化作用參與到腫瘤相關基因的調節。我們預實驗發現不同濃度1,25(OH)2D3對卵巢癌SKOV3細胞生長有抑制作用，並呈時間劑量依賴性。因此我們提出假說1,25(OH)2D3很可能通過組蛋白/DNA去甲基化作用，引起組蛋白H3K27去甲基化，使MLH1重新表達。本課題擬採用人卵巢癌細胞和荷癌裸鼠，利用雷射顯微切割，雷射共聚焦及動物活體成像等先進技術，從體內體外分別探討活性維生素D對MLH1的精細表觀遺傳學調控機制，為卵巢癌的發生及耐藥提供新的靶點。
結題摘要
研究背景及內容:卵巢癌是婦科腫瘤中致死率最高的腫瘤,易對化療藥物順鉑產生耐藥,而大量流行病學研究發現,維生素D缺乏可以作為癌症風險因素,將它與其他藥物聯用，能擴大其抗癌作用。因此，我們研究卵巢癌細胞系中，1,25(OH)2D3對卵巢癌細胞的作用,對順鉑化療敏感性的影響,探討其可能的調控機制.材料和方法：1.用MTT,EDU染色,集落成形、劃痕實驗,Hochest3334染色和流式細胞儀觀察1,25(OH)2D3對卵巢癌細胞的功能學及順鉑耐藥性的影響。2.用WesternBlot檢測各組耐藥相關蛋白（BRCA1，EZH2及H3K27me3，MLH1）和凋亡相關蛋白(P73，P53，Caspase-3，Caspase-9),VDR。3.下調EZH2後1,25(OH)2D3對耐藥性及相關蛋白的影響，4.經1,25(OH)2D3處理後,EZH2及let-7e的表達情況。5，CHIP觀察let-7e是否與VDR相結合。6，下調let-7e,WB和qRT-PCR檢測EZH2的表達水平。7.建立卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,觀察不同給藥組皮下瘤生長情況,並用免疫組化檢測瘤中EZH2、VDR和H3K27me3的表達水平,原位雜交檢測let-7e的表達，TUNEL檢測細胞凋亡情況。結果:1，隨著濃度和作用時間的延長,1,25(OH)2D3對卵巢癌細胞增殖的抑制作用增強，對遷移沒有明顯作用，能促進細胞凋亡。2，1,25(OH)2D3聯用順鉑能增加卵巢癌細胞對順鉑的敏感性，促進凋亡,其凋亡率分別為：37.83%±6.28%和13.93%±0.23%。3.聯用與單獨順鉑相比,BRCA1、MLH1、P53升高,而EZH2、H3K27me3降低。其中1,25(OH)2D3介導的EZH2,H3K27me3下調,VDR,let-7e上調,具有時間和濃度依耐性。4.ChIP結果顯示VDR能直接結合於let-7e的啟動子區。下調let-7e,1,25(OH)2D3下調EZH2的作用可被減弱。5.裸鼠在體實驗結果顯示：與順鉑組相比,聯合組瘤體體積減小、EZH2、H3K27me3的表達減弱,VDR增強；原位雜交和TUNEL結果顯示聯合組較順鉑組let-7e表達升高,細胞凋亡表達信號增強。結論：1,25(OH)2D3可能通過激活let-7e下調EZH2,從而增強卵巢癌細胞對順鉑的敏感性,促進卵巢癌細胞的凋亡。
