《泛素C在輻射損傷與防護中的作用及機制研究》是依託蘇州大學，由曹建平擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：泛素C在輻射損傷與防護中的作用及機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：曹建平
- 依託單位：蘇州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
我們在已結題的國家自然基金項目的研究中發現：青蒿素衍生物能提高P53突變型細胞的放射敏感性，而不影響P53野生型細胞的放射敏感性；引起不同細胞放射敏感性差異的原因是青蒿素衍生物不能上調P53突變型細胞泛素C的表達，但能誘導P53野生型細胞泛素C的高表達；泛素C高表達能提高細胞損傷修復能力。本項目擬選擇P53突變/野生/缺失型細胞，在構建泛素C高/低表達細胞株，轉染P53野生型或不同突變體的P53質粒的基礎上。觀察青蒿素衍生物對照射細胞泛素表達的影響；檢測泛素C表達水平對細胞放射敏感性的影響；分析胞外游離泛素對細胞和動物放射敏感性的影響；尋找P53泛素化位點及P53泛素化在放射應答中的作用。旨在揭示青蒿素衍生物對P53突變/野生型細胞放射增敏差異的機理；探索P53對泛素C的調控機理；明確泛素C表達水平對細胞放射敏感性的影響機制；尋找P53泛素化位點；探討游離泛素分子對輻射損傷與防護的作用機制
結題摘要
（一）泛素作為肺癌放射增敏靶點的研究。1.檢測肺癌及癌旁組織中泛素蛋白表達。泛素蛋白在肺癌組織中的表達量明顯高於癌旁組織（P＜0.001）。2.成功構建並表達抑制泛素基因表達的shRNA-UBB、shRNA-UBC質粒。二者聯合作用對p53缺失型H1299細胞中泛素蛋白水平抑制作用更明顯（抑制率為76%）。3.泛素表達水平對肺癌細胞輻射敏感性的影響。（1）shRNA-UBB、shRNA-UBC聯合作用，對人非小細胞肺癌H1299、A549細胞有增殖抑制作用，其對p53缺失型H1299細胞增殖的抑制作用較p53野生型A549細胞顯著；（2）p53缺失型H1299細胞Ub-KD（shRNA-B4/C2）的放射敏感性增加，Ub-KD對p53野生型A549細胞不具有放射增敏作用。4. Ub-KD放射增敏的機理。下調泛素表達增加誘導（3、6 Gy）X射線照射後H1299細胞的G1期阻滯，降低輻射誘導H1299細胞DNA損傷修復能力，抑制NF-κB活化及轉入胞核內NF-κB蛋白水平降低； 5. 泛素表達水平對裸鼠體內移植瘤放療效果的影響。（1）Ub-KD聯合照射的H1299細胞裸鼠移植瘤體積明顯小於照射組（P＜0.05）。（2）沉默泛素的shRNA質粒能在體內表達。 （二）游離泛素的輻射防護作用的研究。1．小鼠血清中free UB濃度隨著照射劑量和照後時間的延長而增加。2．7 Gy X射線照射後1、3、7、15天恆河猴血清中free UB表達量增加（P＜ 0.01）。3．腫瘤病人放療後血清中free UB的表達量明顯增加。4．7 Gy X照射後，小鼠輻射敏感組織（小腸、脾臟）中free UB表達量均明顯增加，而輻射不敏感組織（心、肝、肺、腎）中free UB表達量無明顯變化。5．輻射提高小鼠小腸中free UB編碼基因UBB mRNA表達量（72.6%），而同一小鼠心臟勻漿中free UB編碼基因UBB mRNA表達量無明顯變化。6．Free UB可明顯提高照射後輻射抗性C57小鼠的存活率。7．Free UB可減輕小鼠骨髓的輻射損傷、對免疫系統具有輻射防護作用，同時，可加快小鼠小腸輻射損傷的恢復。8. Free UB對輻射損傷防護作用的機制。表達譜晶片結果表明，Free UB可通過多種代謝途徑能對小鼠的輻射損傷起到防護作用。
