水牛胚胎冷凍保存技術操作規程

《橫縣魚生製作技術規範》（DB45/T 1817-2018）是2019年6月30日實施的一項中華人民共和國廣西壯族自治區地方標準，由廣西壯族自治區市場監督管理局發布。

地方標準《橫縣魚生製作技術規範》（DB45/T 1817-2018）規定了水牛胚胎超低溫冷凍技術規程，包括程式化冷凍和玻璃化冷凍技術要求。該標準適用於體內胚胎和通過體外受精、單精子胞質內顯微受精、體細胞核移植技術生產的胚胎。

基本介紹

• 中文名：水牛胚胎冷凍保存技術操作規程
• 外文名：Manipulation regulation for cryopreservation of embryos in buffalo
• 標準號：DB45/T 1951-2019
• 發布日期：2019-05-31
• 實施日期：2019-06-30
• 中國標準分類號：B43
• 國際標準分類號：65.020.30
• 批准發布部門：廣西壯族自治區市場監督管理局
• 行業分類：農、林、牧、漁業
• 標準類別：通用
• 歸口單位：廣西畜牧業標準化技術委員會
• 狀態：現行
• 性質：推薦性地方標準

制定過程

制定背景

隨著各級政府對奶水牛產業化的重視，廣西乃至全中國的奶水牛養殖業發展迅速，良種水牛的需求量逐漸超過了自然繁殖所能供給的數量。廣西水產畜牧獸醫局和自然繁殖所正在推出的河流型良種水牛種源產業化實施方案，需要自然繁殖所每年提供至少1000頭良種水牛用於廣西水牛的雜交改良，更是遠遠超過了自然繁殖所水牛種畜場的生產能力。而超數排卵和體外胚胎生產技術可以利用有限的良種水牛資源生產儘量多的良種胚胎，而這些胚胎的推廣和套用都依賴於胚胎冷凍保存技術。因此，如何高效的冷凍保存並且解凍移植水牛胚胎就顯得極為重要。

通過對體內和體外生產的水牛胚胎進行超低溫冷凍，可以長期保存或者遠距離運輸良種水牛胚胎，對於水牛的良種雜交選育具有重要的意義。由於各地對水牛胚胎冷凍的標準不統一，具體選擇哪個評分標準，通常由每個實驗室根據自己的情況確立。因此，必須儘快完成《水牛胚胎冷凍保存技術操作規程》地方標準制定。

編制進程

• 標準計畫

該標準任務來源於廣西壯族自治區質量技術監督局（桂質監函〔2017〕158號）《關於下達2017年第三批廣西地方標準制定（修訂）項目計畫通知》批覆的《水牛胚胎冷凍保存技術操作規程》標準，由廣西壯族自治區農業農村廳提出，由廣西畜牧業標準化技術委員會歸口。

• 前期工作

編制起草承擔單位此前一直進行了水牛胚胎冷凍的相關研究，對於冷凍方法、冷凍液成分、解凍方法、冷凍胚齡、冷凍階段、解凍液成分、胚胎種類等對水牛胚胎冷凍效果的影響進行了全面的研究，並且對冷凍胚胎進行了移植，研究了其胚胎移植效果。並且在Theriogeology（影響因子2.895）上發表了一篇水牛胚胎冷凍最佳化的文章。

• 成立編制起草小組

為確保標準編制的順利實施，做到編制的標準技術含量高，實用性強，確保編制標準高質量、高效率，由廣西水牛研究所技術人員組成編制起草小組，對標準起草工作進行分工，明確任務和職責。編制起草小組由5名高級職稱、3名初級職稱人員共8人組成。

• 查閱相關文獻

2017年6月至2017年8月，收集、整理並總結項目組前期水牛胚胎冷凍相關試驗數據、相關利用技術以及推廣生產實際中的一些操作規程和經驗，查閱關於水牛胚胎冷凍的技術資料。

• 標準徵求意見稿（草案）形成

2017年10月，根據收集及查找的相關資料和文獻，形成標準草稿；在已有科技成果和技術資料的前提下，對區內外技術發展狀況進行調查研究，收集分析有關標準和技術資料，吸收先進技術經驗，進行必要的技術操作測試和驗證，在此基礎上起草完成標準徵求意見稿（1稿），並編寫標準編制說明（1稿）。

• 完善草案，形成標準送審稿

將標準徵求意見稿，分別送有關生產、技術推廣、科研、教學和標準化等方面專家徵求意見，形成徵求專家意見匯總處理表。共收回專家意見7份50條，根據專家意見修改完善標準徵求意見稿，起草完成標準徵求意見稿（第2稿）；將標準徵求意見稿（第2稿）報送廣西水產畜牧獸醫局和標準化專業委員會審核，由廣西壯族自治區質量技術監督局在網上公開徵求意見。

根據網上徵求意見，修改完善標準徵求意見稿（第2稿），起草完成標準送審稿和完善編寫標準編制說明。

• 標準報批稿形成，審定形成廣西地方標準

根據標準審定會專家提出的意見，修改完善標準送審稿，編寫完成標準報批稿。將標準報批稿材料報送廣西水產畜牧獸醫局，經廣西水產畜牧獸醫局和標準化專業委員會審核，由廣西壯族自治區質量技術監督局作為廣西地方標準頒布實施。

• 發布實施

2019年5月31日，地方標準《橫縣魚生製作技術規範》（DB45/T 1817-2018）由中華人民共和國廣西壯族自治區市場監督管理局發布。

2019年6月30日，地方標準《橫縣魚生製作技術規範》（DB45/T 1817-2018）實施。

制定依據

地方標準《橫縣魚生製作技術規範》（DB45/T 1817-2018）依據中國國家標準《標準化工作導則—第1部分：標準的結構和編寫》（GB/T 1.1-2009）規則起草。

起草工作

起草單位：廣西壯族自治區水牛研究所。

主要起草人：楊春艷、尚江華、鄭海英、黃加祥、覃廣勝、黃芬香、於農淇、梁賢威。

標準目次

前言	Ⅰ
1 範圍	1
2 規範性引用檔案	1
3 術語和定義	1
4 試劑、耗材、設備和實驗室要求	2
5 冷凍胚胎的選擇和標記	2
6 冷凍載體的準備	3
7 胚胎的冷凍	3
8 貯存與運輸	4
9 胚胎的解凍	4
附錄A（規範性附錄）試劑、耗材和設備	6
附錄B（規範性附錄）胚胎冷凍和解凍液體	8
附錄C（規範性附錄）胚胎冷凍和解凍記錄表	9

參考資料：

內容範圍

地方標準《橫縣魚生製作技術規範》（DB45/T 1817-2018）規定了水牛胚胎超低溫冷凍技術規程，包括程式化冷凍和玻璃化冷凍技術要求。該標準適用於體內胚胎和通過體外受精、單精子胞質內顯微受精、體細胞核移植技術生產的胚胎。

引用檔案

GB/T 5458 液氮生物容器

GB/T 25881 牛胚胎

參考資料：

意義價值

地方標準《橫縣魚生製作技術規範》（DB45/T 1817-2018）的制定，為水牛胚胎冷凍保存提供一個規範性檔案依據，該標準的實施對促進高產、高效、優質的奶水牛業生產、加快我區乃至全中國水牛雜交改良進程有著極其重要的意義。