《水源性病原微生物的多重快速監測最終技術報告》是王景林、康琳、趙金銀、胡瑞、高姍於2013年8月12日編制的科技報告。
基本介紹
- 中文名：水源性病原微生物的多重快速監測最終技術報告
- 作者：王景林、康琳、趙金銀、胡瑞、高姍
- 編制時間：2013年8月12日
- 報告類型：最終報告
內容摘要
本研究旨在發展和建立靈敏、特異、高通量的水源性病原微生物檢測技術。本實驗中，建立了多個基於xMAP懸浮晶片的水源性病原菌的多重快速檢測方法。包括基於各病原體特異性基因的4重檢測產氣莢膜梭菌、小腸結腸炎耶爾森菌、鼠疫耶爾森菌、單增李斯特菌懸浮晶片；15重檢測志賀菌、霍亂弧菌O1和O139、金黃色葡萄球菌、嗜肺軍團桿菌、肉毒梭菌；基於18S rDNA和snRNP基因對隱孢子蟲在屬和種水平上的檢測，基於16S rDNA和hsp60基因對志賀菌、金葡菌、霍亂弧菌、肉毒梭菌、產氣莢膜梭菌、單增李斯特菌的13重檢測方法。4重檢測單增李斯特菌、產氣莢膜梭菌、小腸結腸炎耶爾森氏菌、鼠疫耶爾森氏菌的靈敏度≤500CFU/ml；15重檢測志賀氏菌、霍亂弧菌O1、O139、金葡菌、嗜肺軍團桿菌、肉毒梭菌A型、B型、E型的靈敏度≤104fg（單重檢測靈敏度≤102fg），與所驗證的40餘種相關菌株均無交叉反應，呈現良好的檢測特異性。以及可在屬、種水平上對隱孢子蟲實現高靈敏的特異檢測，靈敏度達到fg水平，比普通的PCR靈敏1000倍，與球蟲、賈第蟲、毛滴蟲和弓形蟲均無交叉；其次，通過基於16S rDNA和hsp60的液態晶片13重檢測志賀氏菌、金葡菌、霍亂弧菌、嗜肺軍團桿菌、產氣莢膜梭菌、單增李斯特菌的靈敏度≤104fg（單重檢測靈敏度≤102fg）。通過痢疾志賀氏菌、金葡菌的模擬水樣驗證，發現建立的液態晶片技術可實現特異性檢測，但檢測靈敏度降低。本課題成功製備了檢測14餘種病原菌的30多個診斷微球，建立了基於懸浮晶片的多重快速檢測重要水源性病原體的技術。
