《氯離子通道在青光眼視神經保護中的作用機制研究》是依託吉林大學，由鄭雅娟擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：氯離子通道在青光眼視神經保護中的作用機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：鄭雅娟
- 依託單位：吉林大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
青光眼是全球第一位的不可逆性致盲眼病。視網膜神經節細胞(retinal ganglion cells，RGCs)凋亡是青光眼視神經損傷的最終共同通路。由於控制眼壓有時並不能完全阻止視神經的損傷，很多學者正試圖尋找能阻斷或延緩神經節細胞損傷的方法。但RGCs凋亡的發生機制目前尚不完全清楚，最近有關離子通道參與RGCs凋亡的研究正逐步深入，特別是氯離子通道的作用更受到重視。本研究將通過體外培養視網膜神經節細胞永生株(RGC-5)，建立壓力誘導的RGC-5細胞凋亡模型，觀察在多個壓力、時間點下，RGC-5細胞活力、凋亡及氯離子通道ClC-2、ClC-3活性的變化，探討分布於RGC-5上的ClC-2、ClC-3在RGC-5凋亡中的作用和調控途徑，以闡明RGC-5凋亡的發生機制；並利用大鼠青光眼動物模型，觀察氯離子通道阻滯劑、激動劑對RGCs凋亡發生、發展的影響，為青光眼視神經保護治療提供理論依據。
結題摘要
視網膜神經節細胞(retinal ganglion cells, RGCs)的凋亡是視神經損傷、青光眼、缺血性視神經病變等眼科疾病的重要病理特徵之一,也是導致視野缺損的主要原因。谷氨酸是視網膜的主要興奮性遞質,正常情況下不引起毒性。但在眼壓升高等原因導致視網膜缺血缺氧時,谷氨酸會大量釋放,對RGCs產生毒性作用。谷氨酸的過度表達是導致RGCs凋亡的重要原因。氯離子是生物體內含量最豐富的陰離子,通過跨膜轉運和離子通道參與機體多種生物功能。電壓門控性氯通道(voltage-gated chloride channnel, ClC)在哺乳動物細胞中廣泛表達,ClC-2氯離子通道作為此家族中的一個亞型,是目前研究較為廣泛和明確的一種氯離子通道類型,與細胞增殖、凋亡及細胞周期等多種生理功能的調節有關。關於電壓門控性氯通道參與細胞凋亡過程己得到廣泛證實。鑒於此,首先我們以谷氨酸誘導RGCs凋亡作為研究對象,套用cDNA轉染和RNAi方法分別改變細胞內ClC-2的表達,觀察細胞凋亡、細胞周期變化情況及Bcl-2及Bax蛋白表達、caspase-3、caspase-9酶活性變化,以探討ClC-2及Bcl-2/Bax調控的線粒體凋亡通路在此過程中的作用。其次，我們探討了壓力與RGCs ClC-2 mRNA表達及細胞活力、凋亡的關係。證實：在一定的加壓應激條件下，ClC-2可以一定程度維持RGCs的正常細胞活力，降低壓力誘導的RGCs凋亡指數；但壓力過大或者壓力持續過長，ClC-2的適應性細胞保護作用將大大降低。壓力應激條件下，RGCs不但有ClC-2和Hsp90蛋白的表達，而且二者以複合物的形式存在。我們使用Hsp90的特異性抑制劑格爾德黴素（GA），發現GA不能改變ClC-2 mRNA的表達，但可以通過提高ClC-2的活性、提高ClC-2對細胞內氯離子濃度的敏感性的方式對ClC-2加以調節。結論ClC-2氯通道對谷氨酸或壓力誘導的RGCs凋亡具有保護作用,而Bcl-2/Bax調控的線粒體凋亡通路可能參與此過程。另外，Hsp90對氯離子通道ClC-2的電生理活性起正性調節作用。我們的實驗結果提示ClC-2氯通道可能成為視神經保護的一個新靶點,為進一步研究視神經保護提供了理論基礎和實驗依據。
