《氟化物對釉基質蛋白酶的表達及活性的影響》是依託西安交通大學，由阮建平擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：氟化物對釉基質蛋白酶的表達及活性的影響
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：阮建平
- 依託單位：西安交通大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
氟牙症的發生是由於釉質礦化晚期釉原蛋白水解、清除障礙，礦物質沉積受阻所致。氟化物有可能通過影響釉基質蛋白水解酶的合成和/或活性，使釉原蛋白水解、清除不完全，導致氟牙症。本研究套用氟中毒動物模型和離體細胞培養模型，觀察氟對MMP-20和KLK-4兩種蛋白水解酶在時間和空間的表達的影響及其與氟牙症形成的關係；測定了氟對MMP-20和KLK-4轉錄水平的影響，以及氟對二種酶活性的直接和間接影響。以期闡明這兩種酶在氟牙症發生過程中的作用機制，開闢從蛋白水解酶的角度研究氟牙症發病機理的途徑。填補我國在此領域的研究缺陷。為進一步探索氟牙症的發病機制和尋找氟牙症的有效預防措施提供理論依據。
結題摘要
氟化物有可能通過影響釉基質蛋白水解酶的合成和/或活性，使釉原蛋白水解、清除不完全，導致氟牙症。本研究通過氟中毒動物模型和離體細胞培養模型，套用免疫組化、Western Blot和RT-PCR等方法觀察氟對MMP-20和KLK-4蛋白水解酶表達、轉錄水平以及酶活性的影響，以闡明氟牙症的發病機制。結果： 1.通過給懷孕母鼠飲用含氟的飲水，可建立仔鼠的氟中毒模型。2.體外培養的成釉細胞呈鋪路石樣排列，經鑑定其確有成釉細胞的生物特徵。3.MMP20和KLK4主要分布於成釉細胞胞漿和釉質基質中：MMP20在成釉細胞的分泌期和成熟期均有表達，而KLK4主要出現在成熟期。4.在體實驗結果顯示：氟下調了MMP20和KLK4的轉錄水平，導致了其在成釉細胞內的表達下降，且下降的程度與給氟的劑量呈負相關。5.離體實驗顯示：氟確實影響MMP20、KLK4的轉錄水平，使其mRNA表達下調。6.在體研究表明：氟雖然使MMP-20和KLK-4蛋白酶在細胞內的表達量減少，但其水解蛋白的活力無明顯改變。在離體條件下，當緩衝液體系中氟的濃度較高時，rMMP20水解能力下降；而rKLK4水解活性的改變不明顯。 由此推論：在氟牙症形成的過程中，氟未導致MMP20和KLK4的水解活性發生變化；而是通過調低MMP20和KLK4的轉錄水平，導致MMP20和KLK4的表達下降；氟對MMP20和KLK4轉錄水平的影響在離體實驗中得到了進一步的驗證；離體實驗同時表明：MMP20水解蛋白的活性可能因環境中的氟含量較高而導致其水解能力下降。因此，氟導致的MMP20和KLK4的表達下降和高氟條件下MMP20水解蛋白的活性降低可能是釉基質蛋白的水解障礙和清除延遲、釉質礦化異常主要原因。本課題的研究豐富了我國在此領域的研究內容。為進一步探索氟牙症的發病機制和尋找氟牙症的有效預防措施提供理論依據。
